CAJ | 학술논문

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础.方法:PCR扩增制备分别编码Protein A的A、D结构域、Protein G的B2结构域和Protein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入Xba Ⅰ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD-18T载体构建重组质粒.以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性.结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布.结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求.
목적:구건유면역구단백결합분자단결구역수궤조합적서균체전시문고,위응용각충류형면역구단백대해문고진행체외분자진화사선연구타하기출.방법:PCR확증제비분별편마Protein A적A、D결구역、Protein G적B2결구역화Protein L적B3결구역적서렬편단,편단량단인입Xba Ⅰ매절위점,3′단인입분별편마0、1、2、3개안기산대소수궤련접태적서렬,병극륭우pMD-18T재체구건중조질립.이상술16충중조질립위모판,PCR확증분별제비각충단결구역편단급량단부분T재체서렬,XbaⅠ매절,각충매절편단혼합후련접,병극륭우서균체전시재체pCANTAB5S,구건서균체전시면역구단백결합분자단결구역수궤조합문고,도취단극륭진행서렬측정,평개문고적수궤성.결과:서균체전시면역구단백결합분자단결구역수궤조합문고고용량위2×107,적도위1.3×1011;문고중함77%이상적양성극륭,기중유2개이상단결구역조성적양성극륭점24%;서렬분석현시조합문고포함상술4충단결구역서렬,련접방식부합수궤련접적특점,수궤련접태적편마핵산야정수궤분포.결론:성공구건료면역구단백결합분자단결구역수궤조합문고,해문고고용、다양성화수궤성완전가만족진행체외분자진화연구적요구.