高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2005年
5期
874-879
,共6页
崔京霞%纪剑飞%吕安国%吴文芳
崔京霞%紀劍飛%呂安國%吳文芳
최경하%기검비%려안국%오문방
免疫毒素%白细胞介素-4(IL-4)%绿脓杆菌外毒素
免疫毒素%白細胞介素-4(IL-4)%綠膿桿菌外毒素
면역독소%백세포개소-4(IL-4)%록농간균외독소
采用软件分析选择与IL-4分子结合与活性相关的重要位点13T,121R, 通过定点突变得到IL-4突变基因cpIL4(13D121E), 将其与绿脓杆菌外毒素突变基因PE38KDEL融合, 成功地构建了编码免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融合基因. 该基因在原核表达系统中得到了高效表达, 表达量占细胞全蛋白的30%以上. 表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后, 进行细胞毒性实验, 证明其对表达Ⅰ型IL-4受体的淋巴瘤细胞Daudi具有良好的细胞毒作用, 活性是同类型IL-4免疫毒素的2倍, 而对表达Ⅱ型IL-4受体的内皮细胞活性较低.
採用軟件分析選擇與IL-4分子結閤與活性相關的重要位點13T,121R, 通過定點突變得到IL-4突變基因cpIL4(13D121E), 將其與綠膿桿菌外毒素突變基因PE38KDEL融閤, 成功地構建瞭編碼免疫毒素cpIL4(13D121E)-PE38KDEL的融閤基因. 該基因在原覈錶達繫統中得到瞭高效錶達, 錶達量佔細胞全蛋白的30%以上. 錶達產物經親和色譜和陰離子交換色譜純化後, 進行細胞毒性實驗, 證明其對錶達Ⅰ型IL-4受體的淋巴瘤細胞Daudi具有良好的細胞毒作用, 活性是同類型IL-4免疫毒素的2倍, 而對錶達Ⅱ型IL-4受體的內皮細胞活性較低.
채용연건분석선택여IL-4분자결합여활성상관적중요위점13T,121R, 통과정점돌변득도IL-4돌변기인cpIL4(13D121E), 장기여록농간균외독소돌변기인PE38KDEL융합, 성공지구건료편마면역독소cpIL4(13D121E)-PE38KDEL적융합기인. 해기인재원핵표체계통중득도료고효표체, 표체량점세포전단백적30%이상. 표체산물경친화색보화음리자교환색보순화후, 진행세포독성실험, 증명기대표체Ⅰ형IL-4수체적림파류세포Daudi구유량호적세포독작용, 활성시동류형IL-4면역독소적2배, 이대표체Ⅱ형IL-4수체적내피세포활성교저.
