南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2008年
6期
702-706
,共5页
李久明%华立新%冯宁翰%曹戌%吕志刚%秦娣%卢春
李久明%華立新%馮寧翰%曹戌%呂誌剛%秦娣%盧春
리구명%화립신%풍저한%조술%려지강%진제%로춘
人类免疫缺陷病毒1型%病毒颗粒蛋白表达调节因子%人类疱疹病毒8型%复制
人類免疫缺陷病毒1型%病毒顆粒蛋白錶達調節因子%人類皰疹病毒8型%複製
인류면역결함병독1형%병독과립단백표체조절인자%인류포진병독8형%복제
目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression, Rev)编码基因的重组真核表达质粒并初步探索Rev基因编码蛋白对人类疱疹病毒8型(HHV-8)溶解性周期复制的影响.方法:构建pRev-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pRev-Flag重组质粒瞬时转染原发性渗出性淋巴瘤细胞系(PEL)BCBL-1细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Rev基因的表达情况;提取瞬时转染pRev-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测HHV-8次要衣壳蛋白编码基因ORF26 mRNA转录水平.结果:核酸序列分析结果表明,克隆的Rev基因序列与GenBank中已登记的Rev序列100%同源.RT-PCR和Western blot都在Rev预期位置检测到特异性条带.RT-PCR检测显示,Rev基因对编码蛋白能够降低HHV-8 ORF26 mRNA转录水平.结论:成功构建含Rev基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达;初步探索表明Rev蛋白能够抑制HHV-8溶解性周期复制.
目的:構建含人類免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒顆粒蛋白錶達調節因子(regulator of virion protein expression, Rev)編碼基因的重組真覈錶達質粒併初步探索Rev基因編碼蛋白對人類皰疹病毒8型(HHV-8)溶解性週期複製的影響.方法:構建pRev-Flag重組質粒併進行酶切鑒定和序列測定;將pRev-Flag重組質粒瞬時轉染原髮性滲齣性淋巴瘤細胞繫(PEL)BCBL-1細胞和小鼠胚胎成纖維細胞NIH/3T3,採用RT-PCR、Western blot分彆從mRNA和蛋白水平檢測Rev基因的錶達情況;提取瞬時轉染pRev-Flag重組質粒的BCBL-1細胞總RNA,進行RT-PCR檢測HHV-8次要衣殼蛋白編碼基因ORF26 mRNA轉錄水平.結果:覈痠序列分析結果錶明,剋隆的Rev基因序列與GenBank中已登記的Rev序列100%同源.RT-PCR和Western blot都在Rev預期位置檢測到特異性條帶.RT-PCR檢測顯示,Rev基因對編碼蛋白能夠降低HHV-8 ORF26 mRNA轉錄水平.結論:成功構建含Rev基因序列的重組質粒併在真覈細胞中穫得正確錶達;初步探索錶明Rev蛋白能夠抑製HHV-8溶解性週期複製.
목적:구건함인류면역결함병독1형(HIV-1)병독과립단백표체조절인자(regulator of virion protein expression, Rev)편마기인적중조진핵표체질립병초보탐색Rev기인편마단백대인류포진병독8형(HHV-8)용해성주기복제적영향.방법:구건pRev-Flag중조질립병진행매절감정화서렬측정;장pRev-Flag중조질립순시전염원발성삼출성림파류세포계(PEL)BCBL-1세포화소서배태성섬유세포NIH/3T3,채용RT-PCR、Western blot분별종mRNA화단백수평검측Rev기인적표체정황;제취순시전염pRev-Flag중조질립적BCBL-1세포총RNA,진행RT-PCR검측HHV-8차요의각단백편마기인ORF26 mRNA전록수평.결과:핵산서렬분석결과표명,극륭적Rev기인서렬여GenBank중이등기적Rev서렬100%동원.RT-PCR화Western blot도재Rev예기위치검측도특이성조대.RT-PCR검측현시,Rev기인대편마단백능구강저HHV-8 ORF26 mRNA전록수평.결론:성공구건함Rev기인서렬적중조질립병재진핵세포중획득정학표체;초보탐색표명Rev단백능구억제HHV-8용해성주기복제.
