山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2008年
4期
289-292
,共4页
王小伟%孙俊红%籍晓元%杜秋香%王英元
王小偉%孫俊紅%籍曉元%杜鞦香%王英元
왕소위%손준홍%적효원%두추향%왕영원
差异显示技术%锚定引物%随机引物%退火温度
差異顯示技術%錨定引物%隨機引物%退火溫度
차이현시기술%묘정인물%수궤인물%퇴화온도
目的 研究大鼠皮肤肌肉特异性基因的表达,探讨引物的不同、退火温度变化与扩增产物特异性之间的关系. 方法 12只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组与实验组(挫伤4 h).分别提取总RNA,反转录成cDNA,通过不同引物、退火温度及反应体系进行PCR产物扩增,比较不同条件下差异条带的情况. 结果 总RNA量在2～4 μg时,扩增条带最亮;提高反转录温度有利于长片段cDNA的合成;使用TaKaRa公司带有T7启动子的Oligo dT12 NM和M13的随机引物时,可最大限度地减少非特异性条带;先使用低严谨的退火温度,再使用高严谨的退火温度可显著地增强差异条带重复性和敏感性. 结论 差异显示技术方法简便、灵敏、高效,适用于一般性的基因差异表达研究.
目的 研究大鼠皮膚肌肉特異性基因的錶達,探討引物的不同、退火溫度變化與擴增產物特異性之間的關繫. 方法 12隻健康雄性Sprague-Dawley大鼠分為正常對照組與實驗組(挫傷4 h).分彆提取總RNA,反轉錄成cDNA,通過不同引物、退火溫度及反應體繫進行PCR產物擴增,比較不同條件下差異條帶的情況. 結果 總RNA量在2～4 μg時,擴增條帶最亮;提高反轉錄溫度有利于長片段cDNA的閤成;使用TaKaRa公司帶有T7啟動子的Oligo dT12 NM和M13的隨機引物時,可最大限度地減少非特異性條帶;先使用低嚴謹的退火溫度,再使用高嚴謹的退火溫度可顯著地增彊差異條帶重複性和敏感性. 結論 差異顯示技術方法簡便、靈敏、高效,適用于一般性的基因差異錶達研究.
목적 연구대서피부기육특이성기인적표체,탐토인물적불동、퇴화온도변화여확증산물특이성지간적관계. 방법 12지건강웅성Sprague-Dawley대서분위정상대조조여실험조(좌상4 h).분별제취총RNA,반전록성cDNA,통과불동인물、퇴화온도급반응체계진행PCR산물확증,비교불동조건하차이조대적정황. 결과 총RNA량재2～4 μg시,확증조대최량;제고반전록온도유리우장편단cDNA적합성;사용TaKaRa공사대유T7계동자적Oligo dT12 NM화M13적수궤인물시,가최대한도지감소비특이성조대;선사용저엄근적퇴화온도,재사용고엄근적퇴화온도가현저지증강차이조대중복성화민감성. 결론 차이현시기술방법간편、령민、고효,괄용우일반성적기인차이표체연구.
