同济大学学报(医学版)
同濟大學學報(醫學版)
동제대학학보(의학판)
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY
2009年
3期
14-17
,共4页
张洪梅%周亚芹%董艳%冯绮文%李晓永%苏青
張洪梅%週亞芹%董豔%馮綺文%李曉永%囌青
장홍매%주아근%동염%풍기문%리효영%소청
TSH受体%真核表达载体%CHO细胞%转染%稳定表达
TSH受體%真覈錶達載體%CHO細胞%轉染%穩定錶達
TSH수체%진핵표체재체%CHO세포%전염%은정표체
目的 构建pcDNA3.1/人TSH受体(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)基因真核表达载体(已完成),将该真核表达载体在CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)中表达,并筛选获得稳定表达细胞株.方法 通过脂质体介导,用重组质粒pcDNA3.1-hTSHR转染CHO细胞,以G 418筛选稳定表达细胞株,挑取单克隆,扩大培养并传代;取P5代细胞,抽提基因组DNA及蛋白分别用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞hTSHR的表达情况.结果 得到阳性单克隆5个,传代培养.P5代细胞PCR扩增产物为约530 bp特异性条带,大小与预期相符,未见非特异性条带.Western 印记法结果表明被转染CHO传代细胞有hTSHR蛋白表达.结论 pcDNA3.1-hTSHR真核表达载体可以在CHO细胞中稳定表达,成功构建稳定表达细胞株.为测定自身免疫性甲状腺疾病患者血清TSHR奠定了基础.
目的 構建pcDNA3.1/人TSH受體(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)基因真覈錶達載體(已完成),將該真覈錶達載體在CHO細胞(中國倉鼠卵巢細胞)中錶達,併篩選穫得穩定錶達細胞株.方法 通過脂質體介導,用重組質粒pcDNA3.1-hTSHR轉染CHO細胞,以G 418篩選穩定錶達細胞株,挑取單剋隆,擴大培養併傳代;取P5代細胞,抽提基因組DNA及蛋白分彆用PCR及Western blot方法鑒定被轉染CHO細胞hTSHR的錶達情況.結果 得到暘性單剋隆5箇,傳代培養.P5代細胞PCR擴增產物為約530 bp特異性條帶,大小與預期相符,未見非特異性條帶.Western 印記法結果錶明被轉染CHO傳代細胞有hTSHR蛋白錶達.結論 pcDNA3.1-hTSHR真覈錶達載體可以在CHO細胞中穩定錶達,成功構建穩定錶達細胞株.為測定自身免疫性甲狀腺疾病患者血清TSHR奠定瞭基礎.
목적 구건pcDNA3.1/인TSH수체(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)기인진핵표체재체(이완성),장해진핵표체재체재CHO세포(중국창서란소세포)중표체,병사선획득은정표체세포주.방법 통과지질체개도,용중조질립pcDNA3.1-hTSHR전염CHO세포,이G 418사선은정표체세포주,도취단극륭,확대배양병전대;취P5대세포,추제기인조DNA급단백분별용PCR급Western blot방법감정피전염CHO세포hTSHR적표체정황.결과 득도양성단극륭5개,전대배양.P5대세포PCR확증산물위약530 bp특이성조대,대소여예기상부,미견비특이성조대.Western 인기법결과표명피전염CHO전대세포유hTSHR단백표체.결론 pcDNA3.1-hTSHR진핵표체재체가이재CHO세포중은정표체,성공구건은정표체세포주.위측정자신면역성갑상선질병환자혈청TSHR전정료기출.
