CAJ | 학술논문

目的原核表达ΔA146 Ply蛋白,评价ΔA146 Ply黏膜免疫对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)在宿主鼻咽部定植的保护作用.方法 IPTG诱导、Ni-NTA树脂纯化获得纯化的ΔA146 Ply蛋白,经黏膜免疫BALB/C小鼠,制备其特异性抗血清;进行体内抗定植实验,观察小鼠鼻咽部灌洗液和肺部残存的细菌数量,检测ΔA146 Ply黏膜免疫对19F型肺炎链球菌在鼻咽部定植的保护作用.为验证该保护作用是否具有广谱性,培养血清型14型、3型、6型和2型S.pn,经鼻腔感染免疫后小鼠,评价ΔA146 Ply蛋白黏膜免疫对多株肺炎链球菌定植的保护作用.进行体外抗黏附实验,检测ΔA146 Ply蛋白及其抗血清是否对无荚膜的肺炎链球菌R6黏附A549细胞具有抑制作用.结果获得了纯度>90%的目的蛋白;体内实验结果显示,ΔA146 Ply黏膜免疫可以显著降低肺炎链球菌19F在宿主鼻咽部和肺部残存的细菌数量(P<0.01);14型和3型肺炎链球菌在免疫后小鼠鼻咽部及肺部定植的数量均显著下降(P<0.05),2型肺炎链球菌在免疫后小鼠肺部定植的数量显著下降(P<0.05),6B型肺炎链球菌在免疫组与对照组小鼠鼻咽部及肺部均无显著差异(P>0.05);ΔA146 Ply特异性抗血清ΔA146 Ply蛋白对R6黏附A549细胞的抑制效应呈剂量依赖性.结论 ΔA146 Ply蛋白经黏膜免疫BALB/C小鼠可以对多种血清型的肺炎链球菌在宿主鼻咽部及肺部的定植提供显著保护作用,为Ply作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的应用提供了实验依据.
목적 원핵표체ΔA146 Ply단백,평개ΔA146 Ply점막면역대폐염련구균(Streptococcus pneumoniae,S.pn)재숙주비인부정식적보호작용.방법 IPTG유도、Ni-NTA수지순화획득순화적ΔA146 Ply단백,경점막면역BALB/C소서,제비기특이성항혈청;진행체내항정식실험,관찰소서비인부관세액화폐부잔존적세균수량,검측ΔA146 Ply점막면역대19F형폐염련구균재비인부정식적보호작용.위험증해보호작용시부구유엄보성,배양혈청형14형、3형、6형화2형S.pn,경비강감염면역후소서,평개ΔA146 Ply단백점막면역대다주폐염련구균정식적보호작용.진행체외항점부실험,검측ΔA146 Ply단백급기항혈청시부대무협막적폐염련구균R6점부A549세포구유억제작용.결과 획득료순도>90%적목적단백;체내실험결과 현시,ΔA146 Ply점막면역가이현저강저폐염련구균19F재숙주비인부화폐부잔존적세균수량(P<0.01);14형화3형폐염련구균재면역후소서비인부급폐부정식적수량균현저하강(P<0.05),2형폐염련구균재면역후소서폐부정식적수량현저하강(P<0.05),6B형폐염련구균재면역조여대조조소서비인부급폐부균무현저차이(P>0.05);ΔA146 Ply특이성항혈청ΔA146 Ply단백대R6점부A549세포적억제효응정제량의뢰성.결론 ΔA146 Ply단백경점막면역BALB/C소서가이대다충혈청형적폐염련구균재숙주비인부급폐부적정식제공현저보호작용,위Ply작위폐염련구균역묘후선단백적응용제공료실험의거.