潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2012年
1期
41-43,66
,共4页
朱平%鞠吉雨%唐媛媛%邸大琳%王丽娜%孙萍%苗乃法
硃平%鞠吉雨%唐媛媛%邸大琳%王麗娜%孫萍%苗迺法
주평%국길우%당원원%저대림%왕려나%손평%묘내법
mIL-35%载体构建%Hepa1-6
mIL-35%載體構建%Hepa1-6
mIL-35%재체구건%Hepa1-6
目的 构建小鼠IL-35的真核表达载体并使其在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6中表达.方法 采用PCR方法从含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中扩增目的 基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中,经菌落PCR、双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染方法转染到Hepa1-6细胞中,48h后收集细胞,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的 蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定证实重组表达载体构建成功,转染入Hepa1-6细胞经SDS-PAGE电泳和Western Blotting证明均得到与预期相对分子量大小相符的蛋白条带.结论 成功构建小鼠IL-35真核表达载体并在Hepa1-6细胞中表达,为进一步研究mIL-35的生物学功能提供了条件.
目的 構建小鼠IL-35的真覈錶達載體併使其在小鼠肝癌細胞株Hepa1-6中錶達.方法 採用PCR方法從含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中擴增目的 基因片段,將其剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1/V5-HisB中,經菌落PCR、雙酶切鑒定及測序正確後,用脂質體轉染方法轉染到Hepa1-6細胞中,48h後收集細胞,SDS-PAGE和Western Blotting檢測目的 蛋白的錶達.結果 經雙酶切和測序鑒定證實重組錶達載體構建成功,轉染入Hepa1-6細胞經SDS-PAGE電泳和Western Blotting證明均得到與預期相對分子量大小相符的蛋白條帶.結論 成功構建小鼠IL-35真覈錶達載體併在Hepa1-6細胞中錶達,為進一步研究mIL-35的生物學功能提供瞭條件.
목적 구건소서IL-35적진핵표체재체병사기재소서간암세포주Hepa1-6중표체.방법 채용PCR방법종함유소서IL-35기인적pET-30a-mIL-35중확증목적 기인편단,장기극륭도진핵표체재체pcDNA3.1/V5-HisB중,경균락PCR、쌍매절감정급측서정학후,용지질체전염방법전염도Hepa1-6세포중,48h후수집세포,SDS-PAGE화Western Blotting검측목적 단백적표체.결과 경쌍매절화측서감정증실중조표체재체구건성공,전염입Hepa1-6세포경SDS-PAGE전영화Western Blotting증명균득도여예기상대분자량대소상부적단백조대.결론 성공구건소서IL-35진핵표체재체병재Hepa1-6세포중표체,위진일보연구mIL-35적생물학공능제공료조건.
