华南理工大学学报（自然科学版）
華南理工大學學報（自然科學版）
화남리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
5期
84-89
,共6页
潘力%王云艳%王斌%何攀%李俊星
潘力%王雲豔%王斌%何攀%李俊星
반력%왕운염%왕빈%하반%리준성
无孢黑曲霉%根癌农杆菌介导转化%米黑根毛霉脂肪酶%基因表达
無孢黑麯黴%根癌農桿菌介導轉化%米黑根毛黴脂肪酶%基因錶達
무포흑곡매%근암농간균개도전화%미흑근모매지방매%기인표체
黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.
黑麯黴(Aspergillus niger)具有高效的蛋白錶達和分泌能力.為實現異源蛋白在無孢黑麯黴中的高效重組錶達,在優化遺傳篩選標記的基礎上,建立瞭根癌農桿菌介導的、以潮黴素抗性基因為篩選標記的黑麯黴轉化體繫.利用該體繫介導米黑根毛黴脂肪酶(RML)轉化黑麯黴SH-1,通過PCR鑒定、酶活檢測、鎳柱親和層析及SDS-PAGE電泳檢測等確定成功穫得瞭RML的黑麯黴轉化子,併通過髮酵條件優化實現瞭RML的高效錶達,對硝基苯酚比色法測得轉化子酶活最高可達15 U/mL,是其在酵母中錶達水平的10倍以上.
흑곡매(Aspergillus niger)구유고효적단백표체화분비능력.위실현이원단백재무포흑곡매중적고효중조표체,재우화유전사선표기적기출상,건립료근암농간균개도적、이조매소항성기인위사선표기적흑곡매전화체계.이용해체계개도미흑근모매지방매(RML)전화흑곡매SH-1,통과PCR감정、매활검측、얼주친화층석급SDS-PAGE전영검측등학정성공획득료RML적흑곡매전화자,병통과발효조건우화실현료RML적고효표체,대초기분분비색법측득전화자매활최고가체15 U/mL,시기재효모중표체수평적10배이상.
