科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2012年
22期
5438-5441,5446
,共5页
沈燕%赵亚%黄豫晓%梁姣%刘忠湘%李英辉
瀋燕%趙亞%黃豫曉%樑姣%劉忠湘%李英輝
침연%조아%황예효%량교%류충상%리영휘
恶性疟原虫%疫苗%多表位基因
噁性瘧原蟲%疫苗%多錶位基因
악성학원충%역묘%다표위기인
原核表达恶性疟原虫多期多表位基因并制备其多克隆抗体.在前期构建恶性疟原虫复合多期多表位重组真核表达载体的基础上,将测序正确的AMAMEG基因克隆入原核表达载体pGEX4T—1并诱导表达.采用包涵体洗涤的方式纯化目的蛋白,以AMA—1抗体对纯化蛋白进行Western—blot分析.将纯化的融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.通过PCR成功获得长度为1 000bp的恶性疟原虫AMA—1胞外域基因片段,获得了与多表位基因连接后的AMAMEG基因.通过诱导表达,显示在相对分子量约95 000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白.经此纯化的融合蛋白免疫的小鼠能产生特异性抗体,其滴度达到1∶105.纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型疟疾疫苗奠定一定的理论和实践基础.
原覈錶達噁性瘧原蟲多期多錶位基因併製備其多剋隆抗體.在前期構建噁性瘧原蟲複閤多期多錶位重組真覈錶達載體的基礎上,將測序正確的AMAMEG基因剋隆入原覈錶達載體pGEX4T—1併誘導錶達.採用包涵體洗滌的方式純化目的蛋白,以AMA—1抗體對純化蛋白進行Western—blot分析.將純化的融閤蛋白免疫小鼠製備多剋隆抗體.通過PCR成功穫得長度為1 000bp的噁性瘧原蟲AMA—1胞外域基因片段,穫得瞭與多錶位基因連接後的AMAMEG基因.通過誘導錶達,顯示在相對分子量約95 000處有預計大小的特異性條帶,錶明成功錶達齣融閤蛋白.經此純化的融閤蛋白免疫的小鼠能產生特異性抗體,其滴度達到1∶105.純化的融閤蛋白和多剋隆抗體為研究新型瘧疾疫苗奠定一定的理論和實踐基礎.
원핵표체악성학원충다기다표위기인병제비기다극륭항체.재전기구건악성학원충복합다기다표위중조진핵표체재체적기출상,장측서정학적AMAMEG기인극륭입원핵표체재체pGEX4T—1병유도표체.채용포함체세조적방식순화목적단백,이AMA—1항체대순화단백진행Western—blot분석.장순화적융합단백면역소서제비다극륭항체.통과PCR성공획득장도위1 000bp적악성학원충AMA—1포외역기인편단,획득료여다표위기인련접후적AMAMEG기인.통과유도표체,현시재상대분자량약95 000처유예계대소적특이성조대,표명성공표체출융합단백.경차순화적융합단백면역적소서능산생특이성항체,기적도체도1∶105.순화적융합단백화다극륭항체위연구신형학질역묘전정일정적이론화실천기출.
