中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2003年
4期
438-442
,共5页
李红乐%李浩威%邢飞跃%孙学刚%邓宇斌%张秀明%姜勇%李树浓
李紅樂%李浩威%邢飛躍%孫學剛%鄧宇斌%張秀明%薑勇%李樹濃
리홍악%리호위%형비약%손학강%산우빈%장수명%강용%리수농
骨髓%干细胞%脑源性神经营养因子%腺病毒%绿色荧光蛋白%基因融合
骨髓%榦細胞%腦源性神經營養因子%腺病毒%綠色熒光蛋白%基因融閤
골수%간세포%뇌원성신경영양인자%선병독%록색형광단백%기인융합
目的:利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体(proBDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)高效表达.方法:采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-proBDNF和pAdTrack-BDNF, 采用化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-proBDNF和pAd-BDNF;转染293细胞,包装成重组病毒颗粒;将重组病毒上清感染rMSC,用荧光显微镜下观察和Western-blotting鉴定重组病毒在rMSC表达;用Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化; 用Ad -proBDNF和Ad-BDNF的感染的rMSC 接种于裸鼠肌肉内,两周后荧光显微镜下直接观察. 结果:成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能,体内移植实验表明Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC能在体内表达.结论:重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC 可以用于体内移植实验.
目的:利用大腸桿菌細菌內同源重組構建帶有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因的腦源性神經營養因子前體(proBDNF)和腦源性神經營養因子(BDNF)重組腺病毒併在大鼠骨髓間質榦細胞(rMSC)高效錶達.方法:採用兩步亞剋隆的方法將proBDNF和BDNF構建入帶有EGFP錶達盒的腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV中,形成轉移載體pAdTrack-proBDNF和pAdTrack-BDNF, 採用化學轉化法在大腸桿菌BJ5183內與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1同源重組,得到重組腺病毒載體pAd-proBDNF和pAd-BDNF;轉染293細胞,包裝成重組病毒顆粒;將重組病毒上清感染rMSC,用熒光顯微鏡下觀察和Western-blotting鑒定重組病毒在rMSC錶達;用Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC在體外誘導嚮神經樣細胞分化; 用Ad -proBDNF和Ad-BDNF的感染的rMSC 接種于裸鼠肌肉內,兩週後熒光顯微鏡下直接觀察. 結果:成功地構建瞭proBDNF和BDNF重組腺病毒載體併製備齣高滴度重組病毒,重組病毒能在體外培養的rMSC高效錶達併不影響其分化潛能,體內移植實驗錶明Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC能在體內錶達.結論:重組腺病毒具有較高的介導proBDNF和BDNF基因錶達于rMSC的效率,帶有報告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC 可以用于體內移植實驗.
목적:이용대장간균세균내동원중조구건대유증강형록색형광단백(EGFP)보고기인적뇌원성신경영양인자전체(proBDNF)화뇌원성신경영양인자(BDNF)중조선병독병재대서골수간질간세포(rMSC)고효표체.방법:채용량보아극륭적방법장proBDNF화BDNF구건입대유EGFP표체합적선병독천사질립pAdTrack-CMV중,형성전이재체pAdTrack-proBDNF화pAdTrack-BDNF, 채용화학전화법재대장간균BJ5183내여선병독골가질립pAdEasy-1동원중조,득도중조선병독재체pAd-proBDNF화pAd-BDNF;전염293세포,포장성중조병독과립;장중조병독상청감염rMSC,용형광현미경하관찰화Western-blotting감정중조병독재rMSC표체;용Ad -proBDNF화Ad-BDNF감염적rMSC재체외유도향신경양세포분화; 용Ad -proBDNF화Ad-BDNF적감염적rMSC 접충우라서기육내,량주후형광현미경하직접관찰. 결과:성공지구건료proBDNF화BDNF중조선병독재체병제비출고적도중조병독,중조병독능재체외배양적rMSC고효표체병불영향기분화잠능,체내이식실험표명Ad-proBDNF화Ad-BDNF감염적rMSC능재체내표체.결론:중조선병독구유교고적개도proBDNF화BDNF기인표체우rMSC적효솔,대유보고기인EGFP적Ad -proBDNF화Ad-BDNF감염적rMSC 가이용우체내이식실험.
