CAJ | 학술논문

根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计1对引物,PCR扩增LDH基因,首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上,然后连接到表达载体pGEX-KG上,经测序正确后诱导表达.重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在.将超声波破碎的诱导菌液高速离心,其上清用Glutathione Sepharose 4B bead亲和层析纯化.用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western-blot检测,出现目的条带;以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法,该方法具有较好的稳定性和重复性,较高的特异性与敏感性.用建立的ELISA方法与中国兽医药品监察所研制的IHA试剂盒同时检测120份临床血清,二者总符合率为92.5%.用建立的ELISA方法检测了671份临床送检不同年龄阶段的猪血清,结果显示断奶前仔猪猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopnenmoniae,MHP)感染率为44.3%,保育猪为3.0%,育肥猪为17.44%,种猪为73.41%,这初步反映了猪喘气病在各个年龄阶段的感染率.
근거GenBank중적저폐염지원체유산탈경매(LDH)기인서렬설계1대인물,PCR확증LDH기인,수선장확증편단련접도극륭재체pMD18-T상,연후련접도표체재체pGEX-KG상,경측서정학후유도표체.중조질립재대장간균중표체적목적단백이가용성단백화포함체2충형식존재.장초성파파쇄적유도균액고속리심,기상청용Glutathione Sepharose 4B bead친화층석순화.용저폐염지원체적표준양성혈청대순화단백작Western-blot검측,출현목적조대;이순화단백위항원건립료검측저폐염지원체항체적간접ELISA방법,해방법구유교호적은정성화중복성,교고적특이성여민감성.용건립적ELISA방법여중국수의약품감찰소연제적IHA시제합동시검측120빈림상혈청,이자총부합솔위92.5%.용건립적ELISA방법검측료671빈림상송검불동년령계단적저혈청,결과현시단내전자저저폐염지원체(Mycoplasma hyopnenmoniae,MHP)감염솔위44.3%,보육저위3.0%,육비저위17.44%,충저위73.41%,저초보반영료저천기병재각개년령계단적감염솔.