生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
1期
7-11
,共5页
刘雪瑶%鲁雅洁%屈芫%姚俊%魏钦俊%曹新%冯振卿
劉雪瑤%魯雅潔%屈芫%姚俊%魏欽俊%曹新%馮振卿
류설요%로아길%굴원%요준%위흠준%조신%풍진경
人催乳素受体%融合蛋白%原核表达%纯化
人催乳素受體%融閤蛋白%原覈錶達%純化
인최유소수체%융합단백%원핵표체%순화
目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达.方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白.结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带.结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础.
目的:建立人催乳素受體的原覈錶達繫統,併在大腸桿菌中穫得錶達.方法:由RT-PCR穫得人催乳素受體(human prolactin receptor,hPRLR)胞外區氨基痠的編碼序列,擴增併通過酶切位點脩飾後剋隆至pMD18-T載體,經測序正確後,切下編碼序列連接到重組錶達載體pGEX-4T-2中,轉化大腸桿菌Rosetta(DE3),用IPTG誘導重組工程菌錶達,使用穀胱甘肽偶聯的GSTrapFF柱親和層析純化重組蛋白.結果:重組菌株可以錶達GST-hPRLR融閤蛋白,用免疫印跡反應鑒定純化的融閤蛋白,在相對分子質量為37.6×103處有一條帶.結論:利用大腸桿菌錶達繫統穫得瞭較高純度的GST-hPRLR融閤蛋白,為進一步研究催乳素受體的功能和製備特異性的抗體奠定瞭基礎.
목적:건립인최유소수체적원핵표체계통,병재대장간균중획득표체.방법:유RT-PCR획득인최유소수체(human prolactin receptor,hPRLR)포외구안기산적편마서렬,확증병통과매절위점수식후극륭지pMD18-T재체,경측서정학후,절하편마서렬련접도중조표체재체pGEX-4T-2중,전화대장간균Rosetta(DE3),용IPTG유도중조공정균표체,사용곡광감태우련적GSTrapFF주친화층석순화중조단백.결과:중조균주가이표체GST-hPRLR융합단백,용면역인적반응감정순화적융합단백,재상대분자질량위37.6×103처유일조대.결론:이용대장간균표체계통획득료교고순도적GST-hPRLR융합단백,위진일보연구최유소수체적공능화제비특이성적항체전정료기출.
