工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2011年
2期
43-46
,共4页
尹慧祥%易国辉%屠发志%张添元%罗进贤%张爱联
尹慧祥%易國輝%屠髮誌%張添元%囉進賢%張愛聯
윤혜상%역국휘%도발지%장첨원%라진현%장애련
里氏木霉%葡聚糖内切酶%基因表达%P.pastoris%高密度发酵
裏氏木黴%葡聚糖內切酶%基因錶達%P.pastoris%高密度髮酵
리씨목매%포취당내절매%기인표체%P.pastoris%고밀도발효
用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶II(egⅡ)基因.扩增基因经EcoR I和Not I双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ.通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌.工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50L的发酵罐中加入20L发酵液.连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h.放罐时生物量为A600=203,重组EGⅡ产量为90mg/L.表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性.
用套疊PCR法擴增裏氏木黴(Trichoderma reesei)的葡聚糖內切酶II(egⅡ)基因.擴增基因經EcoR I和Not I雙酶切後剋隆進P.pastoris錶達載體pPIC9k,穫得重組錶達質粒pPIC9K-egⅡ.通過電轉法將egⅡ基因重組于P.pastoris基因組,篩選高G418抗性的轉化子作為工程菌.工程菌的髮酵在生物反應器中進行,在50L的髮酵罐中加入20L髮酵液.連續24h補加甘油-PTM4增殖細胞,然後以甲醇為碳源誘導egⅡ基因錶達48 h.放罐時生物量為A600=203,重組EGⅡ產量為90mg/L.錶達產物具有酶解羧甲基纖維素的活性.
용투첩PCR법확증리씨목매(Trichoderma reesei)적포취당내절매II(egⅡ)기인.확증기인경EcoR I화Not I쌍매절후극륭진P.pastoris표체재체pPIC9k,획득중조표체질립pPIC9K-egⅡ.통과전전법장egⅡ기인중조우P.pastoris기인조,사선고G418항성적전화자작위공정균.공정균적발효재생물반응기중진행,재50L적발효관중가입20L발효액.련속24h보가감유-PTM4증식세포,연후이갑순위탄원유도egⅡ기인표체48 h.방관시생물량위A600=203,중조EGⅡ산량위90mg/L.표체산물구유매해최갑기섬유소적활성.
