中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
6期
1120-1123
,共4页
罗玉玉%杨蓉%孔麟麟%任党丽%张文成
囉玉玉%楊蓉%孔麟麟%任黨麗%張文成
라옥옥%양용%공린린%임당려%장문성
ZNF580%转录因子%酵母双杂交%蛋白相互作用
ZNF580%轉錄因子%酵母雙雜交%蛋白相互作用
ZNF580%전록인자%효모쌍잡교%단백상호작용
目的:寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白.方法:以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB.诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选.所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性.随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190 酵母菌进行一对一验证.分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白.结果:确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白.结论:初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础.
目的:尋找可能與鋅指轉錄因子ZNF580存在相互作用的蛋白.方法:以ZNF580基因開放閱讀框作為模版,PCR擴增後連接入酵母錶達質粒pGB.誘餌質粒pGB-ZNF580經測序驗證後轉化酵母菌株Y190,人胎腦cDNA文庫亦轉化到能穩定錶達誘餌蛋白的Y190酵母菌株中,併鋪到含有營養缺陷型培養基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培養皿上進行初步篩選.所得暘性剋隆再進行β-半乳糖苷酶剋隆轉移濾紙實驗進一步去除假暘性.隨機挑取部分暘性剋隆,逐一轉化入含有誘餌質粒的Y190 酵母菌進行一對一驗證.分離暘性剋隆質粒測序,併應用生物信息學方法分析暘性剋隆cDNA編碼的蛋白.結果:確定瞭14種與ZNF580可能存在相互作用的蛋白.結論:初步探討瞭ZNF580的功能及其可能參與的信號轉導通路,為進一步研究轉錄因子ZNF580參與動脈粥樣硬化的機製奠定瞭實驗基礎.
목적:심조가능여자지전록인자ZNF580존재상호작용적단백.방법:이ZNF580기인개방열독광작위모판,PCR확증후련접입효모표체질립pGB.유이질립pGB-ZNF580경측서험증후전화효모균주Y190,인태뇌cDNA문고역전화도능은정표체유이단백적Y190효모균주중,병포도함유영양결함형배양기(SD/-Trp/-His/-Leu)적배양명상진행초보사선.소득양성극륭재진행β-반유당감매극륭전이려지실험진일보거제가양성.수궤도취부분양성극륭,축일전화입함유유이질립적Y190 효모균진행일대일험증.분리양성극륭질립측서,병응용생물신식학방법분석양성극륭cDNA편마적단백.결과:학정료14충여ZNF580가능존재상호작용적단백.결론:초보탐토료ZNF580적공능급기가능삼여적신호전도통로,위진일보연구전록인자ZNF580삼여동맥죽양경화적궤제전정료실험기출.
