实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2003年
6期
428-434
,共7页
熊爱生%姚泉洪%李贤%范惠琴%彭日荷
熊愛生%姚泉洪%李賢%範惠琴%彭日荷
웅애생%요천홍%리현%범혜금%팽일하
ACC氧化酶基因%ACC合成酶基因%反义基因融合%根癌农杆菌%乙烯%番茄
ACC氧化酶基因%ACC閤成酶基因%反義基因融閤%根癌農桿菌%乙烯%番茄
ACC양화매기인%ACC합성매기인%반의기인융합%근암농간균%을희%번가
从番茄品种强力米寿的总DNA中克隆番茄果实特异启动子2A11,以番茄成熟果实的RNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆番茄全长的ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因片段.完成两个基因的克隆和测序后,将888bp的番茄ACC氧化酶基因和943bp的ACC合成酶基因片段串联,构成全长1837bp的融合基因.将该融合基因以反义的方向插入植物双元载体pYPX145中番茄果实表达特异启动子下游,获得ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因融合的植物双元载体pOSACC.该载体外源基因表达单元的两端含两个烟草SAR序列,利于转基因的稳定遗传.以番茄栽培品种合作903子叶和下胚轴为外植体,利用根癌农杆菌进行基因转化,通过200 mg/L卡那霉素选择和GUS检测,获得了105株番茄GUS阳性植株,转基因番茄果实在当代表现明显耐贮特点.经过4代的耐贮和果实农艺性状的综合选择,获得了两个表现良好的株系DR-1和DR-2,两株系果实乙烯释放量显著下降,是未转基因材料的9.5%,番茄的贮存期在50天以上.
從番茄品種彊力米壽的總DNA中剋隆番茄果實特異啟動子2A11,以番茄成熟果實的RNA為模闆,進行RT-PCR擴增,剋隆番茄全長的ACC氧化酶基因和ACC閤成酶基因片段.完成兩箇基因的剋隆和測序後,將888bp的番茄ACC氧化酶基因和943bp的ACC閤成酶基因片段串聯,構成全長1837bp的融閤基因.將該融閤基因以反義的方嚮插入植物雙元載體pYPX145中番茄果實錶達特異啟動子下遊,穫得ACC氧化酶基因和ACC閤成酶基因融閤的植物雙元載體pOSACC.該載體外源基因錶達單元的兩耑含兩箇煙草SAR序列,利于轉基因的穩定遺傳.以番茄栽培品種閤作903子葉和下胚軸為外植體,利用根癌農桿菌進行基因轉化,通過200 mg/L卡那黴素選擇和GUS檢測,穫得瞭105株番茄GUS暘性植株,轉基因番茄果實在噹代錶現明顯耐貯特點.經過4代的耐貯和果實農藝性狀的綜閤選擇,穫得瞭兩箇錶現良好的株繫DR-1和DR-2,兩株繫果實乙烯釋放量顯著下降,是未轉基因材料的9.5%,番茄的貯存期在50天以上.
종번가품충강력미수적총DNA중극륭번가과실특이계동자2A11,이번가성숙과실적RNA위모판,진행RT-PCR확증,극륭번가전장적ACC양화매기인화ACC합성매기인편단.완성량개기인적극륭화측서후,장888bp적번가ACC양화매기인화943bp적ACC합성매기인편단천련,구성전장1837bp적융합기인.장해융합기인이반의적방향삽입식물쌍원재체pYPX145중번가과실표체특이계동자하유,획득ACC양화매기인화ACC합성매기인융합적식물쌍원재체pOSACC.해재체외원기인표체단원적량단함량개연초SAR서렬,리우전기인적은정유전.이번가재배품충합작903자협화하배축위외식체,이용근암농간균진행기인전화,통과200 mg/L잡나매소선택화GUS검측,획득료105주번가GUS양성식주,전기인번가과실재당대표현명현내저특점.경과4대적내저화과실농예성상적종합선택,획득료량개표현량호적주계DR-1화DR-2,량주계과실을희석방량현저하강,시미전기인재료적9.5%,번가적저존기재50천이상.
