肿瘤防治杂志
腫瘤防治雜誌
종류방치잡지
CHINA JOURNAL OF CANCER PREVENTION AND TREATMENT
2005年
1期
5-9
,共5页
丘碧波%许丽艳%邱文冰%黄丽娜%吴梦峰%牛永东%李恩民
丘碧波%許麗豔%邱文冰%黃麗娜%吳夢峰%牛永東%李恩民
구벽파%허려염%구문빙%황려나%오몽봉%우영동%리은민
载体蛋白质类/遗传学%克隆,分子%食管肿瘤/遗传学%食管肿瘤/病理学%基因表达调控%荧光素类
載體蛋白質類/遺傳學%剋隆,分子%食管腫瘤/遺傳學%食管腫瘤/病理學%基因錶達調控%熒光素類
재체단백질류/유전학%극륭,분자%식관종류/유전학%식관종류/병이학%기인표체조공%형광소류
目的:将不同长度的NGAL基因3'端序列(包括外显子、内含子和部分3'侧翼非翻译序列)克隆到pGL3-Promoter(pGLP)载体中,通过检测报告基因荧光素酶活力,确认NGAL 3'端序列中是否含有增强子或抑制子元件.方法:应用PCR技术从SHEEC细胞基因组DNA中扩增出不同长度的NGAL基因片段F5(1 880 bp)和F7(826 bp),将其克隆到pGEM-T easy载体,并测序验证;再亚克隆到pGL3-Promoter载体中,获得pGLP-F5和pGLP-F7表达载体;将pGLP-F5和pGLP-F7载体分别与pRL-TK载体共转染HeLa、EC109和Vero细胞,通过检测相对荧光素酶活力,确认这些NGAL基因片段中是否含有增强子元件.结果:我们成功构建了pGLP-F5和pGLP-F7重组载体.Hela、EC109和Vero转染细胞与pGL3-Promoter相比,酶活力未表现出明显的增强或减弱.结论:在本研究的实验条件下,NGAL基因F5和F7片段内潜在的顺式作用元件并没有发挥作用,或作用不明显.
目的:將不同長度的NGAL基因3'耑序列(包括外顯子、內含子和部分3'側翼非翻譯序列)剋隆到pGL3-Promoter(pGLP)載體中,通過檢測報告基因熒光素酶活力,確認NGAL 3'耑序列中是否含有增彊子或抑製子元件.方法:應用PCR技術從SHEEC細胞基因組DNA中擴增齣不同長度的NGAL基因片段F5(1 880 bp)和F7(826 bp),將其剋隆到pGEM-T easy載體,併測序驗證;再亞剋隆到pGL3-Promoter載體中,穫得pGLP-F5和pGLP-F7錶達載體;將pGLP-F5和pGLP-F7載體分彆與pRL-TK載體共轉染HeLa、EC109和Vero細胞,通過檢測相對熒光素酶活力,確認這些NGAL基因片段中是否含有增彊子元件.結果:我們成功構建瞭pGLP-F5和pGLP-F7重組載體.Hela、EC109和Vero轉染細胞與pGL3-Promoter相比,酶活力未錶現齣明顯的增彊或減弱.結論:在本研究的實驗條件下,NGAL基因F5和F7片段內潛在的順式作用元件併沒有髮揮作用,或作用不明顯.
목적:장불동장도적NGAL기인3'단서렬(포괄외현자、내함자화부분3'측익비번역서렬)극륭도pGL3-Promoter(pGLP)재체중,통과검측보고기인형광소매활력,학인NGAL 3'단서렬중시부함유증강자혹억제자원건.방법:응용PCR기술종SHEEC세포기인조DNA중확증출불동장도적NGAL기인편단F5(1 880 bp)화F7(826 bp),장기극륭도pGEM-T easy재체,병측서험증;재아극륭도pGL3-Promoter재체중,획득pGLP-F5화pGLP-F7표체재체;장pGLP-F5화pGLP-F7재체분별여pRL-TK재체공전염HeLa、EC109화Vero세포,통과검측상대형광소매활력,학인저사NGAL기인편단중시부함유증강자원건.결과:아문성공구건료pGLP-F5화pGLP-F7중조재체.Hela、EC109화Vero전염세포여pGL3-Promoter상비,매활력미표현출명현적증강혹감약.결론:재본연구적실험조건하,NGAL기인F5화F7편단내잠재적순식작용원건병몰유발휘작용,혹작용불명현.
