中国动脉硬化杂志
中國動脈硬化雜誌
중국동맥경화잡지
CHINESE JOURNAL OF ARTERIOSCLEROSIS
2006年
4期
321-324
,共4页
阮景明%朱鹏立%俞兆希%陈慧%李体远
阮景明%硃鵬立%俞兆希%陳慧%李體遠
원경명%주붕립%유조희%진혜%리체원
分子生物学%腺相关病毒%激肽释放酶%共转染%基因治疗%高血压%脐静脉内皮细胞
分子生物學%腺相關病毒%激肽釋放酶%共轉染%基因治療%高血壓%臍靜脈內皮細胞
분자생물학%선상관병독%격태석방매%공전염%기인치료%고혈압%제정맥내피세포
目的研究人激肽释放酶腺相关病毒载体的构建,观察重组病毒感染人脐静脉内皮细胞株后人激肽释放酶基因的表达.方法将人激肽释放酶基因定向克隆入AAV载体质粒pAAV-MCS中,并与两种辅助质粒pAAV-RC和pHelper共转染293细胞,包装成带有人激肽释放酶基因的重组腺相关病毒(rAAV);收集病毒颗粒并测定病毒滴度.以不同滴度的病毒分别感染人脐静脉内皮细胞,逆转录聚合酶链反应定量检测人激肽释放酶在该细胞中的表达.酶联免疫吸附法测定人脐静脉内皮细胞内人激肽释放酶的含量.结果成功获得了重组人激肽释放酶基因AAV载体,重组病毒滴度为6.2×1010个/L.以滴度分别为1×109个/L、1×108个/L和1×107个/L的病毒感染人脐静脉内皮细胞,与空白对照组比较,人激肽释放酶的表达均有增加(P<0.05),但以1×109个/L组升高最明显(P<0.001).结论带有人激肽释放酶的重组腺相关病毒滴度可以稳定地达到1010个/L以上,感染人脐静脉内皮细胞后,人激肽释放酶基因在宿主细胞中的表达明显增强.
目的研究人激肽釋放酶腺相關病毒載體的構建,觀察重組病毒感染人臍靜脈內皮細胞株後人激肽釋放酶基因的錶達.方法將人激肽釋放酶基因定嚮剋隆入AAV載體質粒pAAV-MCS中,併與兩種輔助質粒pAAV-RC和pHelper共轉染293細胞,包裝成帶有人激肽釋放酶基因的重組腺相關病毒(rAAV);收集病毒顆粒併測定病毒滴度.以不同滴度的病毒分彆感染人臍靜脈內皮細胞,逆轉錄聚閤酶鏈反應定量檢測人激肽釋放酶在該細胞中的錶達.酶聯免疫吸附法測定人臍靜脈內皮細胞內人激肽釋放酶的含量.結果成功穫得瞭重組人激肽釋放酶基因AAV載體,重組病毒滴度為6.2×1010箇/L.以滴度分彆為1×109箇/L、1×108箇/L和1×107箇/L的病毒感染人臍靜脈內皮細胞,與空白對照組比較,人激肽釋放酶的錶達均有增加(P<0.05),但以1×109箇/L組升高最明顯(P<0.001).結論帶有人激肽釋放酶的重組腺相關病毒滴度可以穩定地達到1010箇/L以上,感染人臍靜脈內皮細胞後,人激肽釋放酶基因在宿主細胞中的錶達明顯增彊.
목적연구인격태석방매선상관병독재체적구건,관찰중조병독감염인제정맥내피세포주후인격태석방매기인적표체.방법장인격태석방매기인정향극륭입AAV재체질립pAAV-MCS중,병여량충보조질립pAAV-RC화pHelper공전염293세포,포장성대유인격태석방매기인적중조선상관병독(rAAV);수집병독과립병측정병독적도.이불동적도적병독분별감염인제정맥내피세포,역전록취합매련반응정량검측인격태석방매재해세포중적표체.매련면역흡부법측정인제정맥내피세포내인격태석방매적함량.결과성공획득료중조인격태석방매기인AAV재체,중조병독적도위6.2×1010개/L.이적도분별위1×109개/L、1×108개/L화1×107개/L적병독감염인제정맥내피세포,여공백대조조비교,인격태석방매적표체균유증가(P<0.05),단이1×109개/L조승고최명현(P<0.001).결론대유인격태석방매적중조선상관병독적도가이은정지체도1010개/L이상,감염인제정맥내피세포후,인격태석방매기인재숙주세포중적표체명현증강.
