细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2008年
2期
222-228
,共7页
郑丽芳%张红%张小乔%查运红%舒化青%梅元武
鄭麗芳%張紅%張小喬%查運紅%舒化青%梅元武
정려방%장홍%장소교%사운홍%서화청%매원무
TGF-b1%骨髓间充质干细胞%snail%基质金属蛋白酶2%细胞骨架
TGF-b1%骨髓間充質榦細胞%snail%基質金屬蛋白酶2%細胞骨架
TGF-b1%골수간충질간세포%snail%기질금속단백매2%세포골가
采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs),用免疫荧光法对培养第3代的细胞进行鉴定.用改良的Transwell小室及MTT法检测不同浓度TGF- b1对细胞迁移力及细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测TGF-b1作用不同时间细胞snail、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA表达;免疫荧光和Western印迹检测snail表达情况.结果表明密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMMSCs,免疫荧光检测显示培养的细胞CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;外源性TGF-b1对BMMSCs迁移力的促进作用具有剂量依赖性,在2 ng/ml时达到最高.高浓度却抑制BMMSCs的迁移.在2 ng/ml TGF-b1刺激下,细胞凋亡明显降低,snail、MMP-2 mRNA及snail表达明显增高,但对细胞增殖无明显影响.通过研究TGF-b1对BMMSCs的迁移力的影响及作用机制,为体外调控BMMSCs高效迁移入脑从而发挥其修复神经损伤作用提供实验依据和理论基础.
採用密度梯度離心結閤貼壁法分離、培養大鼠骨髓間充質榦細胞(BMMSCs),用免疫熒光法對培養第3代的細胞進行鑒定.用改良的Transwell小室及MTT法檢測不同濃度TGF- b1對細胞遷移力及細胞增殖的影響;流式細胞儀檢測細胞凋亡;RT-PCR檢測TGF-b1作用不同時間細胞snail、基質金屬蛋白酶2(MMP-2)mRNA錶達;免疫熒光和Western印跡檢測snail錶達情況.結果錶明密度梯度離心結閤貼壁法能有效分離、純化大鼠BMMSCs,免疫熒光檢測顯示培養的細胞CD29、CD44錶達暘性,而CD34、CD45錶達陰性;外源性TGF-b1對BMMSCs遷移力的促進作用具有劑量依賴性,在2 ng/ml時達到最高.高濃度卻抑製BMMSCs的遷移.在2 ng/ml TGF-b1刺激下,細胞凋亡明顯降低,snail、MMP-2 mRNA及snail錶達明顯增高,但對細胞增殖無明顯影響.通過研究TGF-b1對BMMSCs的遷移力的影響及作用機製,為體外調控BMMSCs高效遷移入腦從而髮揮其脩複神經損傷作用提供實驗依據和理論基礎.
채용밀도제도리심결합첩벽법분리、배양대서골수간충질간세포(BMMSCs),용면역형광법대배양제3대적세포진행감정.용개량적Transwell소실급MTT법검측불동농도TGF- b1대세포천이력급세포증식적영향;류식세포의검측세포조망;RT-PCR검측TGF-b1작용불동시간세포snail、기질금속단백매2(MMP-2)mRNA표체;면역형광화Western인적검측snail표체정황.결과표명밀도제도리심결합첩벽법능유효분리、순화대서BMMSCs,면역형광검측현시배양적세포CD29、CD44표체양성,이CD34、CD45표체음성;외원성TGF-b1대BMMSCs천이력적촉진작용구유제량의뢰성,재2 ng/ml시체도최고.고농도각억제BMMSCs적천이.재2 ng/ml TGF-b1자격하,세포조망명현강저,snail、MMP-2 mRNA급snail표체명현증고,단대세포증식무명현영향.통과연구TGF-b1대BMMSCs적천이력적영향급작용궤제,위체외조공BMMSCs고효천이입뇌종이발휘기수복신경손상작용제공실험의거화이론기출.
