人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性
인Cu,Zn-SOD기인재필적효모중적표체급은정성
Expression of Human Cu, Zn-SOD Gene in Pichia pastoris and Stability of Expressed Product
  • 万方数据
    中国生物制品学杂志 중국생물제품학잡지
    CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
    2008年 5期 374-377 ,共4页

    迟春萍%隋红%李雨桐%薛向光%王志武%牛灵%刘畅%王艳芳%吴晓娟%郭立君%盛军%李校堃

    지춘평%수홍%리우동%설향광%왕지무%우령%류창%왕염방%오효연%곽립군%성군%리교곤

    人Cu,Zn-SOD基因%真核表达%毕赤酵母%稳定性 人Cu,Zn-SOD基因%真覈錶達%畢赤酵母%穩定性
    인Cu,Zn-SOD기인%진핵표체%필적효모%은정성
    目的 构建人Cu, Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性.方法 根据酵母密码子偏好性,合成人Cu, Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115.甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性.结果 经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的 蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的 蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定.结论 在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu, Zn-SOD基因.
    목적 구건인Cu, Zn-SOD기인적진핵표체재체,전화필적효모,병검측표체산물적은정성.방법 근거효모밀마자편호성,합성인Cu, Zn-SOD기인,극륭지진핵표체재체pPIC9k중,전화필적효모GS115.갑순진행유도표체,SDS-PAGE화Western blot감정표체산물.우화표체조건,병검측조매액적은정성.결과 경SDS-PAGE화Western blot검측,표체적목적 단백상대분자질량위18000좌우;최가표체조건위pH6.0,갑순농도1.5%,지속배양96h;목적 단백점분비단백총량적27%,최고표체량위91mg/L;최가조건하배양액상청적매활성최고체334U/ml,조매대록방화을순은정,대H2O2불은정,대온도유일정적내수성,pH재6화8시교은정.결론 재필적효모GS115중성공표체료구비매활성적인Cu, Zn-SOD기인.
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