CAJ | 학술논문

目的:探讨人间充质干细胞(MSCs)诱导成内皮祖细胞(EPCs),作为携带人伽玛干扰素(hγIFN)基因的载体进行肿瘤免疫治疗的可行性.方法:分离和培养人MSCs,在体外经人血管内皮生长因子(VEGF165,20ng/ml)诱导2周后,用流式细胞仪检测细胞表面标志.用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因,检测腺病毒载体(Ad5-EGFP)对EPCs的感染效率.AdS-hγIFN转染EPCs(EPcs-hγIFN),ELISA法检测EPCs-hγIFN培养上清液中hγIFN浓度.体外EPCs-hγIFN与Lovo结肠癌细胞混合培养,观察对肿瘤细胞的抑制作用.给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-EGFP,观察EPCs的体内分布特点.给荷瘤裸鼠静脉注射EPCs-hγIFN,观察对移植瘤的抑制作用和对存活期的影响.结果:MSCs用VEGF165诱导2周后,分化成CD133、KDR和CD34阳性的EPCs.AdS-EGFP在感染复数(MOI)为150pfu/EPC时,EGFP阳性的EPCs可达95%以上.EPCs-hγIFN培养液中测得hγIFN,浓度达1400pg/ml以上,而且在一段时间内浓度保持稳定.EPCs-hγIFN与Lovo细胞按照1:5的浓度混合培养4天,对Lovo细胞的抑制率为30.48%±3.78%(P＜0.05).通过静脉注射的EPCs-EGFP主要分布在肿瘤组织,而非其他器官组织.尾静脉注射EPCs-hγIFN可以抑制肿瘤的生长(肿瘤重量:EPCs-hγIFN组0.48±0.78g,空白对照组2.47±2.58g,P＜0.05),而皮下注射hγyIFN和静脉注射EPCs-EGFY对肿瘤无抑制作用.尾静脉注射EPCs-hγIFN延长荷瘤裸鼠的存活时间(中位存活时间:EPCs-hγIFN组为35天,空白对照组为32夭,P＜0.05).结论:EPCs可以靶向性的分布到肿瘤局部,可以作为免疫性基因载体在肿瘤治疗领域进行进一步的研究.
목적:탐토인간충질간세포(MSCs)유도성내피조세포(EPCs),작위휴대인가마간우소(hγIFN)기인적재체진행종류면역치료적가행성.방법:분리화배양인MSCs,재체외경인혈관내피생장인자(VEGF165,20ng/ml)유도2주후,용류식세포의검측세포표면표지.용증강형록색형광단백(EGFP)기인작위보고기인,검측선병독재체(Ad5-EGFP)대EPCs적감염효솔.AdS-hγIFN전염EPCs(EPcs-hγIFN),ELISA법검측EPCs-hγIFN배양상청액중hγIFN농도.체외EPCs-hγIFN여Lovo결장암세포혼합배양,관찰대종류세포적억제작용.급하류라서정맥주사EPCs-EGFP,관찰EPCs적체내분포특점.급하류라서정맥주사EPCs-hγIFN,관찰대이식류적억제작용화대존활기적영향.결과:MSCs용VEGF165유도2주후,분화성CD133、KDR화CD34양성적EPCs.AdS-EGFP재감염복수(MOI)위150pfu/EPC시,EGFP양성적EPCs가체95%이상.EPCs-hγIFN배양액중측득hγIFN,농도체1400pg/ml이상,이차재일단시간내농도보지은정.EPCs-hγIFN여Lovo세포안조1:5적농도혼합배양4천,대Lovo세포적억제솔위30.48%±3.78%(P＜0.05).통과정맥주사적EPCs-EGFP주요분포재종류조직,이비기타기관조직.미정맥주사EPCs-hγIFN가이억제종류적생장(종류중량:EPCs-hγIFN조0.48±0.78g,공백대조조2.47±2.58g,P＜0.05),이피하주사hγyIFN화정맥주사EPCs-EGFY대종류무억제작용.미정맥주사EPCs-hγIFN연장하류라서적존활시간(중위존활시간:EPCs-hγIFN조위35천,공백대조조위32요,P＜0.05).결론:EPCs가이파향성적분포도종류국부,가이작위면역성기인재체재종류치료영역진행진일보적연구.