山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2010年
3期
205-209,240
,共6页
DNMT1基因%反义RNA%乳腺癌%MDA-MB-435s
DNMT1基因%反義RNA%乳腺癌%MDA-MB-435s
DNMT1기인%반의RNA%유선암%MDA-MB-435s
目的 构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响.方法 应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMTl反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染人人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化.结果 成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒.转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加.结论 反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标.
目的 構建錶達人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反義RNA的真覈錶達質粒,觀察其對乳腺癌細胞MDA-MB-435s增殖的影響.方法 應用DNA重組技術,將人DNMT1基因的cDNA片段剋隆至pcDNA3.1(-)載體中,構建DNMTl反義RNA真覈錶達質粒,測序驗證,將其轉染人人乳腺癌細胞繫中,利用熒光定量PCR法檢測轉染前後細胞DN-MT1基因mRNA錶達水平的變化;Western blot檢測轉染後DNMT1蛋白錶達變化;應用MTT法檢測細胞生長狀況,繪製細胞生長麯線;流式細胞術分析細胞週期的變化.結果 成功構建齣能夠錶達DNMT1反義RNA的真覈錶達質粒.轉染該質粒後,與未轉染組和轉染正義質粒組相比,MDA-MB-435s細胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白錶達量均顯著下降;細胞生長變慢;細胞週期分析可見S期明顯減少,而G1/G0期細胞顯著增加.結論 反義DNMT1能夠特異性下調該基因的錶達,併抑製乳腺癌細胞的增殖,為乳腺癌基因治療提供瞭新的靶標.
목적 구건표체인DNMT1기인(DNA methyltransferase 1,DNMT1)반의RNA적진핵표체질립,관찰기대유선암세포MDA-MB-435s증식적영향.방법 응용DNA중조기술,장인DNMT1기인적cDNA편단극륭지pcDNA3.1(-)재체중,구건DNMTl반의RNA진핵표체질립,측서험증,장기전염인인유선암세포계중,이용형광정량PCR법검측전염전후세포DN-MT1기인mRNA표체수평적변화;Western blot검측전염후DNMT1단백표체변화;응용MTT법검측세포생장상황,회제세포생장곡선;류식세포술분석세포주기적변화.결과 성공구건출능구표체DNMT1반의RNA적진핵표체질립.전염해질립후,여미전염조화전염정의질립조상비,MDA-MB-435s세포중DNMT1기인mRNA화DNMT1단백표체량균현저하강;세포생장변만;세포주기분석가견S기명현감소,이G1/G0기세포현저증가.결론 반의DNMT1능구특이성하조해기인적표체,병억제유선암세포적증식,위유선암기인치료제공료신적파표.
