中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2011年
2期
131-136
,共6页
李来邦%李立%冉江华%赵永恒%张升宁%刘静%李铸%蒋益舟
李來邦%李立%冉江華%趙永恆%張升寧%劉靜%李鑄%蔣益舟
리래방%리립%염강화%조영항%장승저%류정%리주%장익주
大鼠%galectin-9%基因克隆%腺病毒载体%RT-PCR
大鼠%galectin-9%基因剋隆%腺病毒載體%RT-PCR
대서%galectin-9%기인극륭%선병독재체%RT-PCR
目的 克隆大鼠galectin-9基因全长cDNA,构建含大鼠galectin-9基因的重组腺病毒载体,并予以鉴定.方法 从大鼠的肝脏组织中用RT-PCR的方法克隆扩增大鼠galectin-9基因,再定向插人到带Not Ⅰ和HindⅢ酶切的pDC316-GFP穿梭质粒中.获得穿梭质粒pDC316-GFP-galectin-9.经PCR、Not Ⅰ和HindⅢ酶切及测序鉴定后,用脂质体将穿梭质粒pDC316-GFP-galectin-9与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1.3Cre共转染HEK-293细胞.经位点特异性重组获得含目的基因的重组腺病毒Ad5-galectin-9,行PCR鉴定,经HEK-293细胞扩增及纯化制备高滴度病毒液,用细胞培养方法测定病毒TCID<,50>滴度.结果 PCR、酶切及测序证实穿梭质粒构建正确,PCR鉴定证实大鼠galectin-9基因重组腺病毒载体构建正确,病毒的感染滴度为1.4×10<'9>U/ml.结论 成功构建了含大鼠galectin-9基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究大鼠galectin-9基因的功能奠定了基础.
目的 剋隆大鼠galectin-9基因全長cDNA,構建含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒載體,併予以鑒定.方法 從大鼠的肝髒組織中用RT-PCR的方法剋隆擴增大鼠galectin-9基因,再定嚮插人到帶Not Ⅰ和HindⅢ酶切的pDC316-GFP穿梭質粒中.穫得穿梭質粒pDC316-GFP-galectin-9.經PCR、Not Ⅰ和HindⅢ酶切及測序鑒定後,用脂質體將穿梭質粒pDC316-GFP-galectin-9與腺病毒骨架質粒pBHGlox△E1.3Cre共轉染HEK-293細胞.經位點特異性重組穫得含目的基因的重組腺病毒Ad5-galectin-9,行PCR鑒定,經HEK-293細胞擴增及純化製備高滴度病毒液,用細胞培養方法測定病毒TCID<,50>滴度.結果 PCR、酶切及測序證實穿梭質粒構建正確,PCR鑒定證實大鼠galectin-9基因重組腺病毒載體構建正確,病毒的感染滴度為1.4×10<'9>U/ml.結論 成功構建瞭含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒錶達載體,為進一步研究大鼠galectin-9基因的功能奠定瞭基礎.
목적 극륭대서galectin-9기인전장cDNA,구건함대서galectin-9기인적중조선병독재체,병여이감정.방법 종대서적간장조직중용RT-PCR적방법극륭확증대서galectin-9기인,재정향삽인도대Not Ⅰ화HindⅢ매절적pDC316-GFP천사질립중.획득천사질립pDC316-GFP-galectin-9.경PCR、Not Ⅰ화HindⅢ매절급측서감정후,용지질체장천사질립pDC316-GFP-galectin-9여선병독골가질립pBHGlox△E1.3Cre공전염HEK-293세포.경위점특이성중조획득함목적기인적중조선병독Ad5-galectin-9,행PCR감정,경HEK-293세포확증급순화제비고적도병독액,용세포배양방법측정병독TCID<,50>적도.결과 PCR、매절급측서증실천사질립구건정학,PCR감정증실대서galectin-9기인중조선병독재체구건정학,병독적감염적도위1.4×10<'9>U/ml.결론 성공구건료함대서galectin-9기인적중조선병독표체재체,위진일보연구대서galectin-9기인적공능전정료기출.
