复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2012年
5期
496-501
,共6页
郭满%林晶%陈进宏%蔡端
郭滿%林晶%陳進宏%蔡耑
곽만%림정%진진굉%채단
骨桥蛋白(OPN)%小发夹RNA(shRNA)%慢病毒载体%小鼠
骨橋蛋白(OPN)%小髮夾RNA(shRNA)%慢病毒載體%小鼠
골교단백(OPN)%소발협RNA(shRNA)%만병독재체%소서
目的 构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果.方法 参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA) OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA 重组体.经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液.经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Westem blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果.结果 成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109TU/mL病毒原液.与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别.结论 利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型.为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具.
目的 構建骨橋蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA榦擾慢病毒載體併在小鼠體內鑒定其抑製效果.方法 參照OPN GenBank上的序列,對OPN基因沉默位點進行分析,設計針對OPN信使RNA的小髮夾RNA(short hairpin RNA,shRNA) OPN-shRNA及陰性對照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,閤成pSicoR-GFP-shRNA 重組體.經鑒定序列無誤後,與pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91輔助質粒包裝併轉染293FT細胞,得到有效滴度為5×109 TU/mL的病毒原液.經尾靜脈將構建的慢病毒載體註射入小鼠體內,qRT-PCR及Westem blot檢測小鼠肝髒OPN mRNA及蛋白的抑製效果.結果 成功構建針對OPN的shRNA慢病毒載體,經純化、濃縮得到滴度為5×109TU/mL病毒原液.與正常對照組、陰性對照組相比,實驗組OPN mRNA及蛋白錶達水平明顯下降;正常對照組、實驗組OPN mRNA及蛋白錶達水平無明顯差彆.結論 利用RNA榦擾技術,藉助慢病毒載體,成功構建小鼠肝髒OPN基因低錶達模型.為進一步研究OPN在膽石癥等疾病中的作用提供瞭有力工具.
목적 구건골교단백(osteopontin,OPN)기인RNA간우만병독재체병재소서체내감정기억제효과.방법 삼조OPN GenBank상적서렬,대OPN기인침묵위점진행분석,설계침대OPN신사RNA적소발협RNA(short hairpin RNA,shRNA) OPN-shRNA급음성대조(negative control-shRNA,NC-shRNA)서렬,합성pSicoR-GFP-shRNA 중조체.경감정서렬무오후,여pCMV-VSV-G화pCMV-dR8.91보조질립포장병전염293FT세포,득도유효적도위5×109 TU/mL적병독원액.경미정맥장구건적만병독재체주사입소서체내,qRT-PCR급Westem blot검측소서간장OPN mRNA급단백적억제효과.결과 성공구건침대OPN적shRNA만병독재체,경순화、농축득도적도위5×109TU/mL병독원액.여정상대조조、음성대조조상비,실험조OPN mRNA급단백표체수평명현하강;정상대조조、실험조OPN mRNA급단백표체수평무명현차별.결론 이용RNA간우기술,차조만병독재체,성공구건소서간장OPN기인저표체모형.위진일보연구OPN재담석증등질병중적작용제공료유력공구.
