中华器官移植杂志
中華器官移植雜誌
중화기관이식잡지
CHINESE JOURNAL OF ORGAN TRANSPLANTATION
2011年
10期
614-617
,共4页
余玉明%刘艳君%邓文锋%于立新
餘玉明%劉豔君%鄧文鋒%于立新
여옥명%류염군%산문봉%우립신
单核细胞%细胞培养技术%CD8阳性T淋巴细胞%T淋巴细胞,抑制效应
單覈細胞%細胞培養技術%CD8暘性T淋巴細胞%T淋巴細胞,抑製效應
단핵세포%세포배양기술%CD8양성T림파세포%T림파세포,억제효응
Monocytes%Cell culture techniques%CD8-positive T-lymphocytes%T-lymphocytes,suppressor-effector
目的 探讨在体外大量扩增CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞(Ts细胞)的方法,并检验其免疫调节作用.方法 分离健康志愿者全血中CD8+T淋巴细胞,在含不同细胞因子和异体抗原提呈细胞(APC)的培养条件下进行体外扩增.应用流式细胞术对扩增过程中CD28 -细胞亚群的比例进行监测.分为3组进行混合淋巴细胞培养,反应细胞均为CD4+T淋巴细胞:B-APc组以来源于原致敏供者的APC作为刺激细胞,I-APC组以HLA-A、B、DR全错配的无关供者的APC作为刺激细胞,Dynabeads组以包被有抗CD3和CD28单克隆抗体的免疫微球Dynabeads作为刺激细胞；扩增后的Ts细胞作为第三方调节细胞加入混合淋巴细胞培养中,测定其对CD4+T淋巴细胞增殖的抑制作用.结果 在含白细胞介素2(IL-2)+ IL-7+ IL-15的培养条件下,CD8+T淋巴细胞培养后CD8+CD28-T淋巴细胞亚群的比例最高(P＜0.05).B-APC组不加入Ts细胞时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例为66.7％,当加入的Ts细胞与反应细胞的比例分别为0.5∶1、0.1∶1和0.02∶1时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例分别为16.5％、34.1％和62.6％.Ts细胞对CD4+T淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,而在I-APC组和Dynabeads组中,此抑制作用不明显.结论 应用含IL-2+ IL-7+ IL-15的培养条件联合异体APC刺激可以在体外大量扩增Ts细胞,扩增所得Ts细胞在体外对供者CD4+T淋巴细胞的增殖有明显抗原特异性抑制作用.
目的 探討在體外大量擴增CD8+CD28-抑製性T淋巴細胞(Ts細胞)的方法,併檢驗其免疫調節作用.方法 分離健康誌願者全血中CD8+T淋巴細胞,在含不同細胞因子和異體抗原提呈細胞(APC)的培養條件下進行體外擴增.應用流式細胞術對擴增過程中CD28 -細胞亞群的比例進行鑑測.分為3組進行混閤淋巴細胞培養,反應細胞均為CD4+T淋巴細胞:B-APc組以來源于原緻敏供者的APC作為刺激細胞,I-APC組以HLA-A、B、DR全錯配的無關供者的APC作為刺激細胞,Dynabeads組以包被有抗CD3和CD28單剋隆抗體的免疫微毬Dynabeads作為刺激細胞；擴增後的Ts細胞作為第三方調節細胞加入混閤淋巴細胞培養中,測定其對CD4+T淋巴細胞增殖的抑製作用.結果 在含白細胞介素2(IL-2)+ IL-7+ IL-15的培養條件下,CD8+T淋巴細胞培養後CD8+CD28-T淋巴細胞亞群的比例最高(P＜0.05).B-APC組不加入Ts細胞時,增殖的CD4+T淋巴細胞比例為66.7％,噹加入的Ts細胞與反應細胞的比例分彆為0.5∶1、0.1∶1和0.02∶1時,增殖的CD4+T淋巴細胞比例分彆為16.5％、34.1％和62.6％.Ts細胞對CD4+T淋巴細胞的增殖有明顯抑製作用,而在I-APC組和Dynabeads組中,此抑製作用不明顯.結論 應用含IL-2+ IL-7+ IL-15的培養條件聯閤異體APC刺激可以在體外大量擴增Ts細胞,擴增所得Ts細胞在體外對供者CD4+T淋巴細胞的增殖有明顯抗原特異性抑製作用.
목적 탐토재체외대량확증CD8+CD28-억제성T림파세포(Ts세포)적방법,병검험기면역조절작용.방법 분리건강지원자전혈중CD8+T림파세포,재함불동세포인자화이체항원제정세포(APC)적배양조건하진행체외확증.응용류식세포술대확증과정중CD28 -세포아군적비례진행감측.분위3조진행혼합림파세포배양,반응세포균위CD4+T림파세포:B-APc조이래원우원치민공자적APC작위자격세포,I-APC조이HLA-A、B、DR전착배적무관공자적APC작위자격세포,Dynabeads조이포피유항CD3화CD28단극륭항체적면역미구Dynabeads작위자격세포；확증후적Ts세포작위제삼방조절세포가입혼합림파세포배양중,측정기대CD4+T림파세포증식적억제작용.결과 재함백세포개소2(IL-2)+ IL-7+ IL-15적배양조건하,CD8+T림파세포배양후CD8+CD28-T림파세포아군적비례최고(P＜0.05).B-APC조불가입Ts세포시,증식적CD4+T림파세포비례위66.7％,당가입적Ts세포여반응세포적비례분별위0.5∶1、0.1∶1화0.02∶1시,증식적CD4+T림파세포비례분별위16.5％、34.1％화62.6％.Ts세포대CD4+T림파세포적증식유명현억제작용,이재I-APC조화Dynabeads조중,차억제작용불명현.결론 응용함IL-2+ IL-7+ IL-15적배양조건연합이체APC자격가이재체외대량확증Ts세포,확증소득Ts세포재체외대공자CD4+T림파세포적증식유명현항원특이성억제작용.
Objective To study the In vitro expansion of human CD8+ CD28- suppressor T cells and their immunological regulatory effect.Methods Human CD8 + CD28- suppressor T cells were expanded in vitro driven by the combination of cytokines and allogeneic antigen presenting cells (APCs).Flow cytometry was used to assess the development of CD28- subpopulation.Expanded CD8+ CD28- T cells were isolated by immunomagnetic microspheres and then added as third part modulators into mixed lymphocyte culture to assess their immunological regulatory characteristics.Results The combination of cytokines included IL-2,IL-7 and IL-15 and allogeneic APCs could increase the portion of CD8 + CD28- T cell subtype,and expansion fold of CD8+ CD28- T cell subtype was significantly increased as compared with others (P＜0.05).Expanded CD8+ CD28- T cells could suppress the proliferation of CD4+ T cells stimulated by allogeneic APCs.Moreover,this suppression had antigen specificity.Conclusion Human CD8 + CD28- suppressor T cells can be in vitro expanded in large amounts driven by the combination of cytokines and allogeneic APCs.Expanded CD8 + CD28- T cells in this study have antigen specific regulatory characteristics.
