中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
5期
400-404
,共5页
王官清%井上直樹%野沢直樹
王官清%井上直樹%野沢直樹
왕관청%정상직수%야택직수
水痘-带状疱疹病毒%启动子%上游刺激因子%Pbx-1%NF-κB
水痘-帶狀皰疹病毒%啟動子%上遊刺激因子%Pbx-1%NF-κB
수두-대상포진병독%계동자%상유자격인자%Pbx-1%NF-κB
目的 从水痘-带状疱疹病毒(VZV)主要基因的启动子中找到最容易被VZV感染激活的启动子及其最短有效序列以构建VZV报告细胞系.方法 构建18个VZV开放读码框架(ORF)启动子的重组报告质粒,用基因转染瞬时表达分析法比较各启动子在VZV感染早期启动报告基因产物表达的活性;将最容易被激活的启动子从5'和3'端截短后构建截短启动子的重组报告质粒,比较各截短启动子的活性以找到启动子的最短有效序列;应用点定向突变技术将最短有效序列中细胞转录因子的结合序列进行碱基置换突变后比较突变启动子的启动活性.结果 VZV感染早期ORF9、ORF61和ORF66的启动子最容易被激活;ORF9启动子的最短有效序列位于-127～-34(93 bp),其上游刺激因子(USF)结合序列的碱基置换突变后启动子活性降低50%;ORF61启动子的最短有效序列位于-227～-52(165 bp),其Pbx-1结合序列的碱基置换突变后启动子活性增强一倍,但NF-κB结合序列的突变对启动子活性无影响.结论 ORF9启动子的最短有效序列最适合用来构建VZV报告细胞系.
目的 從水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)主要基因的啟動子中找到最容易被VZV感染激活的啟動子及其最短有效序列以構建VZV報告細胞繫.方法 構建18箇VZV開放讀碼框架(ORF)啟動子的重組報告質粒,用基因轉染瞬時錶達分析法比較各啟動子在VZV感染早期啟動報告基因產物錶達的活性;將最容易被激活的啟動子從5'和3'耑截短後構建截短啟動子的重組報告質粒,比較各截短啟動子的活性以找到啟動子的最短有效序列;應用點定嚮突變技術將最短有效序列中細胞轉錄因子的結閤序列進行堿基置換突變後比較突變啟動子的啟動活性.結果 VZV感染早期ORF9、ORF61和ORF66的啟動子最容易被激活;ORF9啟動子的最短有效序列位于-127～-34(93 bp),其上遊刺激因子(USF)結閤序列的堿基置換突變後啟動子活性降低50%;ORF61啟動子的最短有效序列位于-227～-52(165 bp),其Pbx-1結閤序列的堿基置換突變後啟動子活性增彊一倍,但NF-κB結閤序列的突變對啟動子活性無影響.結論 ORF9啟動子的最短有效序列最適閤用來構建VZV報告細胞繫.
목적 종수두-대상포진병독(VZV)주요기인적계동자중조도최용역피VZV감염격활적계동자급기최단유효서렬이구건VZV보고세포계.방법 구건18개VZV개방독마광가(ORF)계동자적중조보고질립,용기인전염순시표체분석법비교각계동자재VZV감염조기계동보고기인산물표체적활성;장최용역피격활적계동자종5'화3'단절단후구건절단계동자적중조보고질립,비교각절단계동자적활성이조도계동자적최단유효서렬;응용점정향돌변기술장최단유효서렬중세포전록인자적결합서렬진행감기치환돌변후비교돌변계동자적계동활성.결과 VZV감염조기ORF9、ORF61화ORF66적계동자최용역피격활;ORF9계동자적최단유효서렬위우-127～-34(93 bp),기상유자격인자(USF)결합서렬적감기치환돌변후계동자활성강저50%;ORF61계동자적최단유효서렬위우-227～-52(165 bp),기Pbx-1결합서렬적감기치환돌변후계동자활성증강일배,단NF-κB결합서렬적돌변대계동자활성무영향.결론 ORF9계동자적최단유효서렬최괄합용래구건VZV보고세포계.
