CAJ | 학술논문

目的: 构建乙型肝炎病毒(HBV)截短C基因和前S1基因重组原核表达质粒,获得融合蛋白的表达并进行抗原性分析. 方法: PCR扩增获得截短C基因片段和前S1基因,双酶切后克隆至原核表达质粒pET28a,转化E.coli DH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pET28a并测序;然后转化E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白组成;可溶性分析后用Ni2+-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白,Western Blot分析特异性和抗原性. 结果: 成功构建了HBV 截短C基因和前S1基因融合的原核表达质粒pET28a-Ct-preS1,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni2+-NTA 纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和特异性. 结论: HBV截短HBcAg和preS1抗原融合蛋白可高效表达并得到纯化,为研究新型乙肝疫苗奠定了基础.
목적: 구건을형간염병독(HBV)절단C기인화전S1기인중조원핵표체질립,획득융합단백적표체병진행항원성분석. 방법: PCR확증획득절단C기인편단화전S1기인,쌍매절후극륭지원핵표체질립pET28a,전화E.coli DH5α,매절감정득양성중조질립pET28a병측서;연후전화E.coli BL21,IPTG유도융합단백표체,박층소묘분석표체단백조성;가용성분석후용Ni2+-NTA응효친화층석주순화、투석병농축융합단백,Western Blot분석특이성화항원성. 결과: 성공구건료HBV 절단C기인화전S1기인융합적원핵표체질립pET28a-Ct-preS1,목적기인가고효표체,표체산물주요이포함체형식존재,Ni2+-NTA 순화가획득목적단백,순화단백구유량호적항원성화특이성. 결론: HBV절단HBcAg화preS1항원융합단백가고효표체병득도순화,위연구신형을간역묘전정료기출.