目的:利用骨髓基质干细胞、人重组骨形成蛋白2及聚乳酸复合构建组织工程骨,诱导颌骨再生,修复颌骨缺损,并对其成骨效能进行评价.方法:实验于2003-04/2004-04在青岛大学附属医学院中心实验室完成.选取普通级杂种犬12只,随机分为4组,即骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组、人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组、聚乳酸+骨髓基质干细胞组、聚乳酸组,3只/组.全部动物双侧下颌骨体部分别造成30 mm×12 mm椭圆形缺损,用自身对照法,右侧骨缺损为实验侧,左侧为空白对照侧.取犬骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞,给予不同材料复合后植入颌骨缺损区:骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组植入骨髓基质干细胞、人重组骨形成蛋白2与聚乳酸;人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组植入人重组骨形成蛋白2与聚乳酸;聚乳酸+骨髓基质干细胞组植入聚乳酸、骨髓基质干细胞;聚乳酸组植入聚乳酸.术后第2,4,8周行X线、组织病理及扫描电镜检查,观察成骨情况.结果:实验纳入12只犬,全部进入结果分析.①培养过程中细胞形态观察:原代培养24 h后部分细胞贴壁,48 h后贴壁细胞向四周伸展,边缘的细胞呈梭形,散在生长的细胞呈椭圆形或梭形;10～12 d后细胞集落间相互融合成单层,形态多为梭形.细胞传代培养后4 h开始贴壁,8～10 h基本贴壁完全,细胞大部分向梭形、多角形细胞转化,带有数个突起.②传代细胞密集区Von Kossa染色结果:细胞密集区出现大面积黑染区域,即钙结节,而细胞密度较低的区域并无着色.③各组第8周时两侧成骨情况大体观察:骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组实验侧缺损为板层骨修复,质硬,部分区域呈骨性突起;人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组实验侧缺损为不完全修复;聚乳酸+骨髓基质干细胞组实验侧缺损可见散在骨岛形成;聚乳酸组实验侧缺损区仅在边缘有新骨形成.各组空白对照侧均为纤维组织充填.④各组第8周两侧成骨情况X线检查结果:实验侧:骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组植入区可见较规则骨小梁像;人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组植入区可见少量密度高的骨痂影形成;聚乳酸+骨髓基质干细胞组骨床边界较模糊,植入区可见密度高的骨痂影形成;聚乳酸组植入区点片状密度较高的影像.各组空白对照侧8周时植入区均无阻射影像.⑤各组第8周两侧成骨情况组织学检查:实验侧:骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组新生骨形成大片状结构,植入区内骨髓腔开始形成,聚乳酸大部分降解,新生血管数目增多,有的穿过降解的聚乳酸内部;人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组以纤维成骨方式为主,也可见软骨化骨过程,骨小梁增多;聚乳酸+骨髓基质干细胞组缺损区有较多散在骨岛形成,可见软骨化骨;聚乳酸组骨缺损不完全修复,纤维组织嵌于缺损区,骨床边缘成骨细胞较活跃;骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组实验侧的成骨量明显优于其余3组;各组空白对照侧均未见有新骨形成,缺损为纤维组织充填.⑥骨髓基质干细胞+人重组骨形成蛋白2+聚乳酸组第8周两侧成骨情况扫描电镜检查结果:实验侧聚乳酸大部分吸收,被骨组织替代,可见小血管穿入聚乳酸内,新骨内骨细胞分布均匀,骨细胞位于陷窝内,孔隙内可见骨质沉积;空白对照侧见大量纤维蛋白,未见骨组织形成.结论:骨髓基质干细胞在体外可定向诱导为成骨细胞,并能钙化形成新骨.外源性骨形成蛋白可促进骨髓基质干细胞增殖,与降解速率及骨再生速率相匹配的聚乳酸复合,具有快速成骨的效能,可作为良好的骨缺损修复材料.
目的:利用骨髓基質榦細胞、人重組骨形成蛋白2及聚乳痠複閤構建組織工程骨,誘導頜骨再生,脩複頜骨缺損,併對其成骨效能進行評價.方法:實驗于2003-04/2004-04在青島大學附屬醫學院中心實驗室完成.選取普通級雜種犬12隻,隨機分為4組,即骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組、人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組、聚乳痠+骨髓基質榦細胞組、聚乳痠組,3隻/組.全部動物雙側下頜骨體部分彆造成30 mm×12 mm橢圓形缺損,用自身對照法,右側骨缺損為實驗側,左側為空白對照側.取犬骨髓基質榦細胞誘導為成骨細胞,給予不同材料複閤後植入頜骨缺損區:骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組植入骨髓基質榦細胞、人重組骨形成蛋白2與聚乳痠;人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組植入人重組骨形成蛋白2與聚乳痠;聚乳痠+骨髓基質榦細胞組植入聚乳痠、骨髓基質榦細胞;聚乳痠組植入聚乳痠.術後第2,4,8週行X線、組織病理及掃描電鏡檢查,觀察成骨情況.結果:實驗納入12隻犬,全部進入結果分析.①培養過程中細胞形態觀察:原代培養24 h後部分細胞貼壁,48 h後貼壁細胞嚮四週伸展,邊緣的細胞呈梭形,散在生長的細胞呈橢圓形或梭形;10～12 d後細胞集落間相互融閤成單層,形態多為梭形.細胞傳代培養後4 h開始貼壁,8～10 h基本貼壁完全,細胞大部分嚮梭形、多角形細胞轉化,帶有數箇突起.②傳代細胞密集區Von Kossa染色結果:細胞密集區齣現大麵積黑染區域,即鈣結節,而細胞密度較低的區域併無著色.③各組第8週時兩側成骨情況大體觀察:骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組實驗側缺損為闆層骨脩複,質硬,部分區域呈骨性突起;人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組實驗側缺損為不完全脩複;聚乳痠+骨髓基質榦細胞組實驗側缺損可見散在骨島形成;聚乳痠組實驗側缺損區僅在邊緣有新骨形成.各組空白對照側均為纖維組織充填.④各組第8週兩側成骨情況X線檢查結果:實驗側:骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組植入區可見較規則骨小樑像;人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組植入區可見少量密度高的骨痂影形成;聚乳痠+骨髓基質榦細胞組骨床邊界較模糊,植入區可見密度高的骨痂影形成;聚乳痠組植入區點片狀密度較高的影像.各組空白對照側8週時植入區均無阻射影像.⑤各組第8週兩側成骨情況組織學檢查:實驗側:骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組新生骨形成大片狀結構,植入區內骨髓腔開始形成,聚乳痠大部分降解,新生血管數目增多,有的穿過降解的聚乳痠內部;人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組以纖維成骨方式為主,也可見軟骨化骨過程,骨小樑增多;聚乳痠+骨髓基質榦細胞組缺損區有較多散在骨島形成,可見軟骨化骨;聚乳痠組骨缺損不完全脩複,纖維組織嵌于缺損區,骨床邊緣成骨細胞較活躍;骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組實驗側的成骨量明顯優于其餘3組;各組空白對照側均未見有新骨形成,缺損為纖維組織充填.⑥骨髓基質榦細胞+人重組骨形成蛋白2+聚乳痠組第8週兩側成骨情況掃描電鏡檢查結果:實驗側聚乳痠大部分吸收,被骨組織替代,可見小血管穿入聚乳痠內,新骨內骨細胞分佈均勻,骨細胞位于陷窩內,孔隙內可見骨質沉積;空白對照側見大量纖維蛋白,未見骨組織形成.結論:骨髓基質榦細胞在體外可定嚮誘導為成骨細胞,併能鈣化形成新骨.外源性骨形成蛋白可促進骨髓基質榦細胞增殖,與降解速率及骨再生速率相匹配的聚乳痠複閤,具有快速成骨的效能,可作為良好的骨缺損脩複材料.
목적:이용골수기질간세포、인중조골형성단백2급취유산복합구건조직공정골,유도합골재생,수복합골결손,병대기성골효능진행평개.방법:실험우2003-04/2004-04재청도대학부속의학원중심실험실완성.선취보통급잡충견12지,수궤분위4조,즉골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조、인중조골형성단백2+취유산조、취유산+골수기질간세포조、취유산조,3지/조.전부동물쌍측하합골체부분별조성30 mm×12 mm타원형결손,용자신대조법,우측골결손위실험측,좌측위공백대조측.취견골수기질간세포유도위성골세포,급여불동재료복합후식입합골결손구:골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조식입골수기질간세포、인중조골형성단백2여취유산;인중조골형성단백2+취유산조식입인중조골형성단백2여취유산;취유산+골수기질간세포조식입취유산、골수기질간세포;취유산조식입취유산.술후제2,4,8주행X선、조직병리급소묘전경검사,관찰성골정황.결과:실험납입12지견,전부진입결과분석.①배양과정중세포형태관찰:원대배양24 h후부분세포첩벽,48 h후첩벽세포향사주신전,변연적세포정사형,산재생장적세포정타원형혹사형;10～12 d후세포집락간상호융합성단층,형태다위사형.세포전대배양후4 h개시첩벽,8～10 h기본첩벽완전,세포대부분향사형、다각형세포전화,대유수개돌기.②전대세포밀집구Von Kossa염색결과:세포밀집구출현대면적흑염구역,즉개결절,이세포밀도교저적구역병무착색.③각조제8주시량측성골정황대체관찰:골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조실험측결손위판층골수복,질경,부분구역정골성돌기;인중조골형성단백2+취유산조실험측결손위불완전수복;취유산+골수기질간세포조실험측결손가견산재골도형성;취유산조실험측결손구부재변연유신골형성.각조공백대조측균위섬유조직충전.④각조제8주량측성골정황X선검사결과:실험측:골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조식입구가견교규칙골소량상;인중조골형성단백2+취유산조식입구가견소량밀도고적골가영형성;취유산+골수기질간세포조골상변계교모호,식입구가견밀도고적골가영형성;취유산조식입구점편상밀도교고적영상.각조공백대조측8주시식입구균무조사영상.⑤각조제8주량측성골정황조직학검사:실험측:골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조신생골형성대편상결구,식입구내골수강개시형성,취유산대부분강해,신생혈관수목증다,유적천과강해적취유산내부;인중조골형성단백2+취유산조이섬유성골방식위주,야가견연골화골과정,골소량증다;취유산+골수기질간세포조결손구유교다산재골도형성,가견연골화골;취유산조골결손불완전수복,섬유조직감우결손구,골상변연성골세포교활약;골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조실험측적성골량명현우우기여3조;각조공백대조측균미견유신골형성,결손위섬유조직충전.⑥골수기질간세포+인중조골형성단백2+취유산조제8주량측성골정황소묘전경검사결과:실험측취유산대부분흡수,피골조직체대,가견소혈관천입취유산내,신골내골세포분포균균,골세포위우함와내,공극내가견골질침적;공백대조측견대량섬유단백,미견골조직형성.결론:골수기질간세포재체외가정향유도위성골세포,병능개화형성신골.외원성골형성단백가촉진골수기질간세포증식,여강해속솔급골재생속솔상필배적취유산복합,구유쾌속성골적효능,가작위량호적골결손수복재료.
