CAJ | 학술논문

目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv).方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因.经Sf Ⅰ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr).以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性.结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700 bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His.IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27 000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合.结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础.
목적:제비인태반산성철단백(PAF),구건、표체병감정항인PAF단련가변구항체편단(scFv).방법:설계이SfiⅠ、NotⅠ위매절위점、이(Gly4Ser)3위linker적2대인물,종항인PAF단극륭항체가변구기인적극륭재체중확증VH화VL기인,용중첩연신PCR재VH화VL기인간인입련접단태,구건VH-linker-VL적scFv기인.경Sf Ⅰ、NotⅠ매절후극륭도원핵분비형표체재체pUC19/119상,전화대장간균TG1화사선후측서험증,IPTG유도표체,SDS-PAGE감정기상대분자질량(Mr).이인PAF위항원,scFv위일항,항His단극륭항체위이항,간접ELISA감정기항체활성.결과:중첩연신PCR확증산물경응효전영가견약700 bp적조대,DNA서렬분석증명2주항체구유완정적scFv서렬,병함유c-myc화His.IPTG유도양성균표체산물경SDS-PAGE감정유Mr약27 000적현시조대,부합scFv여표체표첨융합단백적이론치;간접ELISA증명표체산물가여PAF결합.결론:성공구건병표체료항인PAF단련항체,위진일보건립검측PAF적간접ELISA전정료기출.