中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
2期
141-146
,共6页
石亚伟%陈云霞%崔丽方%袁静明
石亞偉%陳雲霞%崔麗方%袁靜明
석아위%진운하%최려방%원정명
环酰亚胺水解酶%C-末端区%带电荷氨基酸%分子构象%稳定性
環酰亞胺水解酶%C-末耑區%帶電荷氨基痠%分子構象%穩定性
배선아알수해매%C-말단구%대전하안기산%분자구상%은정성
为了研究一个新环酰亚胺水解酶(CIH)C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响,设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lys替代为2个Glu或2个Leu的突变酶,以野生型酶基因重组质粒pE-cih293为模板,在相应引物存在下,通过PCR扩增获得突变的CIH基因片段.经克隆、表达与纯化,得到不同的突变酶蛋白.酶活性测定、荧光光谱与CD谱分析表明,随着C-末端缺失残基的增多,酶活性丧失也越来越多,但酶分子的聚合状态未发生变化;当CIH的C末端2个Lys替代为2个Glu时,酶活性及分子结构变化均不明显,但当替代为2个Leu时,酶活性丧失殆尽,分子结构变得松散而不再保持寡聚态.pH及热稳定性实验也表明,酶的稳定性与其分子的完整性密切相关.结果证实,CIH的C末端电荷残基对该酶活性与分子状态具有重要作用.
為瞭研究一箇新環酰亞胺水解酶(CIH)C耑區殘基對酶分子構象及酶活性的影響,設計瞭C末耑缺失1～4箇氨基痠殘基以及C-末耑2箇Lys替代為2箇Glu或2箇Leu的突變酶,以野生型酶基因重組質粒pE-cih293為模闆,在相應引物存在下,通過PCR擴增穫得突變的CIH基因片段.經剋隆、錶達與純化,得到不同的突變酶蛋白.酶活性測定、熒光光譜與CD譜分析錶明,隨著C-末耑缺失殘基的增多,酶活性喪失也越來越多,但酶分子的聚閤狀態未髮生變化;噹CIH的C末耑2箇Lys替代為2箇Glu時,酶活性及分子結構變化均不明顯,但噹替代為2箇Leu時,酶活性喪失殆儘,分子結構變得鬆散而不再保持寡聚態.pH及熱穩定性實驗也錶明,酶的穩定性與其分子的完整性密切相關.結果證實,CIH的C末耑電荷殘基對該酶活性與分子狀態具有重要作用.
위료연구일개신배선아알수해매(CIH)C단구잔기대매분자구상급매활성적영향,설계료C말단결실1～4개안기산잔기이급C-말단2개Lys체대위2개Glu혹2개Leu적돌변매,이야생형매기인중조질립pE-cih293위모판,재상응인물존재하,통과PCR확증획득돌변적CIH기인편단.경극륭、표체여순화,득도불동적돌변매단백.매활성측정、형광광보여CD보분석표명,수착C-말단결실잔기적증다,매활성상실야월래월다,단매분자적취합상태미발생변화;당CIH적C말단2개Lys체대위2개Glu시,매활성급분자결구변화균불명현,단당체대위2개Leu시,매활성상실태진,분자결구변득송산이불재보지과취태.pH급열은정성실험야표명,매적은정성여기분자적완정성밀절상관.결과증실,CIH적C말단전하잔기대해매활성여분자상태구유중요작용.
