中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
2期
262-265
,共4页
血管内皮生长因子类%肾肿瘤%基因表达
血管內皮生長因子類%腎腫瘤%基因錶達
혈관내피생장인자류%신종류%기인표체
目的:构建反义血管内皮生长因子基因表达载体,观察其对肾癌细胞血管内皮生长因子表达的影响.方法:实验于2006-07/2007-03在郑州大学第三附属医院实验中心完成.①实验材料:质粒pcDNA3.1(-),宿主菌DH5α,肾癌细胞株786-0.②实验过程:克隆人血管内皮生长因子基因,将反义血管内皮生长因子基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)表达载体,酶切鉴定;转染人肾癌细胞,并分别命名为反义血管内皮生长因子组和空载体组,未转染细胞命名为对照组;G418筛选阳性克隆.③实验评估:反转录-聚合酶链反应方法检测血管内皮生长因子mRNA的表达,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子基因的蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长情况.结果:①成功构建反义血管内皮生长因子基因表达载体.②反义血管内皮生长因子组血管内皮生长因子mRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组血管内皮生长因子mRNA的表达(P＜0.01),空载体组血管内皮生长因子mRNA的表达没有受到影响.③反义血管内皮生长因子组的血管内皮生长因子蛋白表达明显降低,明显低于空载体组和对照组(P＜0.01),空载体组和对照组血管内皮生长因子蛋白的表达差异无显著性.④反义血管内皮生长因子组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,反义血管内皮生长因子组细胞生长明显减慢.结论:成功构建血管内皮生长因子的pcDNA3.1(-)反义基因表达载体,人反义血管内皮生长因子基因可明显降低肾癌细胞血管内皮生长因子基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据.
目的:構建反義血管內皮生長因子基因錶達載體,觀察其對腎癌細胞血管內皮生長因子錶達的影響.方法:實驗于2006-07/2007-03在鄭州大學第三附屬醫院實驗中心完成.①實驗材料:質粒pcDNA3.1(-),宿主菌DH5α,腎癌細胞株786-0.②實驗過程:剋隆人血管內皮生長因子基因,將反義血管內皮生長因子基因定嚮剋隆于質粒pcDNA3.1(-)錶達載體,酶切鑒定;轉染人腎癌細胞,併分彆命名為反義血管內皮生長因子組和空載體組,未轉染細胞命名為對照組;G418篩選暘性剋隆.③實驗評估:反轉錄-聚閤酶鏈反應方法檢測血管內皮生長因子mRNA的錶達,免疫組織化學法檢測血管內皮生長因子基因的蛋白錶達,流式細胞術檢測細胞週期,四甲基偶氮唑鹽法檢測細胞生長情況.結果:①成功構建反義血管內皮生長因子基因錶達載體.②反義血管內皮生長因子組血管內皮生長因子mRNA的錶達受到抑製,明顯低于空載體組和對照組血管內皮生長因子mRNA的錶達(P＜0.01),空載體組血管內皮生長因子mRNA的錶達沒有受到影響.③反義血管內皮生長因子組的血管內皮生長因子蛋白錶達明顯降低,明顯低于空載體組和對照組(P＜0.01),空載體組和對照組血管內皮生長因子蛋白的錶達差異無顯著性.④反義血管內皮生長因子組細胞生長減慢,G1期細胞比例增加,S期細胞比例減少,反義血管內皮生長因子組細胞生長明顯減慢.結論:成功構建血管內皮生長因子的pcDNA3.1(-)反義基因錶達載體,人反義血管內皮生長因子基因可明顯降低腎癌細胞血管內皮生長因子基因在轉錄和翻譯水平的錶達,抑製腎癌細胞生長,為腎癌基因治療提供一定的實驗依據.
목적:구건반의혈관내피생장인자기인표체재체,관찰기대신암세포혈관내피생장인자표체적영향.방법:실험우2006-07/2007-03재정주대학제삼부속의원실험중심완성.①실험재료:질립pcDNA3.1(-),숙주균DH5α,신암세포주786-0.②실험과정:극륭인혈관내피생장인자기인,장반의혈관내피생장인자기인정향극륭우질립pcDNA3.1(-)표체재체,매절감정;전염인신암세포,병분별명명위반의혈관내피생장인자조화공재체조,미전염세포명명위대조조;G418사선양성극륭.③실험평고:반전록-취합매련반응방법검측혈관내피생장인자mRNA적표체,면역조직화학법검측혈관내피생장인자기인적단백표체,류식세포술검측세포주기,사갑기우담서염법검측세포생장정황.결과:①성공구건반의혈관내피생장인자기인표체재체.②반의혈관내피생장인자조혈관내피생장인자mRNA적표체수도억제,명현저우공재체조화대조조혈관내피생장인자mRNA적표체(P＜0.01),공재체조혈관내피생장인자mRNA적표체몰유수도영향.③반의혈관내피생장인자조적혈관내피생장인자단백표체명현강저,명현저우공재체조화대조조(P＜0.01),공재체조화대조조혈관내피생장인자단백적표체차이무현저성.④반의혈관내피생장인자조세포생장감만,G1기세포비례증가,S기세포비례감소,반의혈관내피생장인자조세포생장명현감만.결론:성공구건혈관내피생장인자적pcDNA3.1(-)반의기인표체재체,인반의혈관내피생장인자기인가명현강저신암세포혈관내피생장인자기인재전록화번역수평적표체,억제신암세포생장,위신암기인치료제공일정적실험의거.
