中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2008年
1期
33-43
,共11页
张斌%伦文辉%成军%赵龙凤%毛羽%李兴旺%王琦%梁赟磊%向天新
張斌%倫文輝%成軍%趙龍鳳%毛羽%李興旺%王琦%樑赟磊%嚮天新
장빈%륜문휘%성군%조룡봉%모우%리흥왕%왕기%량빈뢰%향천신
结核抗原%早期分泌抗原靶分子%培养滤液蛋白10%原核表达
結覈抗原%早期分泌抗原靶分子%培養濾液蛋白10%原覈錶達
결핵항원%조기분비항원파분자%배양려액단백10%원핵표체
目的 构建结核早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及重组CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融合蛋白的原核表达载体,获得纯化蛋白并比较三者表达特点.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增ESAT-6、CFP-10基因片段,融合PCR技术扩增rCFP10-ESAT6片段,分别连接到pGEM-T载体,测序正确后插入原核表达载体pET-32a(+)或 pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化3种蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析验证目的蛋白的抗原特异性.结果 pET-32a(+)-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达,分子量为31 kD,目的蛋白约占菌体总蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重组蛋白以可溶性形式表达,分子量分别为33 kD和28 kD,目的蛋白分别占菌体总蛋白的73%和48%;Western blot证实其均具有良好的抗原性.亲和层析法获得了纯度较高的重组蛋白.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融合蛋白及rCFP10-ESAT6重组蛋白,为深入研究其免疫原性和生物学特性奠定了基础.
目的 構建結覈早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培養濾液蛋白10(CFP-10)及重組CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融閤蛋白的原覈錶達載體,穫得純化蛋白併比較三者錶達特點.方法 應用聚閤酶鏈反應(PCR)技術,擴增ESAT-6、CFP-10基因片段,融閤PCR技術擴增rCFP10-ESAT6片段,分彆連接到pGEM-T載體,測序正確後插入原覈錶達載體pET-32a(+)或 pET-28a(+)中,轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達,親和層析法純化3種蛋白;十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、Western blot分析驗證目的蛋白的抗原特異性.結果 pET-32a(+)-ESAT6融閤蛋白以包涵體形式錶達,分子量為31 kD,目的蛋白約佔菌體總蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重組蛋白以可溶性形式錶達,分子量分彆為33 kD和28 kD,目的蛋白分彆佔菌體總蛋白的73%和48%;Western blot證實其均具有良好的抗原性.親和層析法穫得瞭純度較高的重組蛋白.結論 利用大腸埃希菌BL21(DE3)成功錶達瞭具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融閤蛋白及rCFP10-ESAT6重組蛋白,為深入研究其免疫原性和生物學特性奠定瞭基礎.
목적 구건결핵조기분비항원파분자(ESAT-6)、배양려액단백10(CFP-10)급중조CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)융합단백적원핵표체재체,획득순화단백병비교삼자표체특점.방법 응용취합매련반응(PCR)기술,확증ESAT-6、CFP-10기인편단,융합PCR기술확증rCFP10-ESAT6편단,분별련접도pGEM-T재체,측서정학후삽입원핵표체재체pET-32a(+)혹 pET-28a(+)중,전화대장애희균BL21(DE3),IPTG유도표체,친화층석법순화3충단백;십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、Western blot분석험증목적단백적항원특이성.결과 pET-32a(+)-ESAT6융합단백이포함체형식표체,분자량위31 kD,목적단백약점균체총단백적42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6중조단백이가용성형식표체,분자량분별위33 kD화28 kD,목적단백분별점균체총단백적73%화48%;Western blot증실기균구유량호적항원성.친화층석법획득료순도교고적중조단백.결론 이용대장애희균BL21(DE3)성공표체료구유량호항원성적ESAT-6、CFP-10융합단백급rCFP10-ESAT6중조단백,위심입연구기면역원성화생물학특성전정료기출.
