CAJ | 학술논문

目的:探讨靶向结缔组织生长因子(CTGF)的锤头核酶抑制TGF-β1作用下人肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)合成及其细胞周期进程的作用.方法:构建含有人CTGF锤头核酶cDNA序列的重组质粒pTriCTGF-Rz.将空质粒pTriEx2和重组质粒pTriCTGF-Rz分别转染人肝星状细胞系(LX-2)细胞.细胞分为4组:pTriEx2转染组,pTriEx2转染加TGF-β1组,pTriCTGF-R2转染加TGF-β1组和pTriCTGF-Rz转染组.采用半定量RT-PCR测定LX-2细胞CTGF mRNA和Col Ⅰ mRNA转录水平,采用ELISA和流式细胞仪分别用于LX-2细胞Col Ⅰ分泌功能和LX-2细胞周期进程的检测.结果:TGF-β1可明显提高LX-2细胞CTGFmRNA和Col Ⅰ mRNA的转录水平及分泌Col Ⅰ蛋白功能(t=11.14,14.36,7.17,均P＜0.01);pTriCTGF-Rz转染LX-2细胞既能降低基础CTGF mRNA和Col Ⅰ mRNA水平及Col Ⅰ蛋白水平(t=2.86,3.06,2.97,均P＜0.05),又能部分拮抗TGF-β1诱导LX-2细胞CTGF mRNA和Col Ⅰ mRNA转录和Col Ⅰ蛋白分泌的增加(t=2.99,3.09,3.02,均P＜0.05).TGF-β1对LX-2细胞周期进程无影响.结论:CTGF是TGF-β1作用下人肝星状细胞合成Col Ⅰ的下游介导者,TGF-β1对HSC周期进程无影响,靶向CTGF有可能成为肝纤维化基因治疗的新靶点.
목적:탐토파향결체조직생장인자(CTGF)적추두핵매억제TGF-β1작용하인간성상세포(HSC)Ⅰ형효원(Col Ⅰ)합성급기세포주기진정적작용.방법:구건함유인CTGF추두핵매cDNA서렬적중조질립pTriCTGF-Rz.장공질립pTriEx2화중조질립pTriCTGF-Rz분별전염인간성상세포계(LX-2)세포.세포분위4조:pTriEx2전염조,pTriEx2전염가TGF-β1조,pTriCTGF-R2전염가TGF-β1조화pTriCTGF-Rz전염조.채용반정량RT-PCR측정LX-2세포CTGF mRNA화Col Ⅰ mRNA전록수평,채용ELISA화류식세포의분별용우LX-2세포Col Ⅰ분비공능화LX-2세포주기진정적검측.결과:TGF-β1가명현제고LX-2세포CTGFmRNA화Col Ⅰ mRNA적전록수평급분비Col Ⅰ단백공능(t=11.14,14.36,7.17,균P＜0.01);pTriCTGF-Rz전염LX-2세포기능강저기출CTGF mRNA화Col Ⅰ mRNA수평급Col Ⅰ단백수평(t=2.86,3.06,2.97,균P＜0.05),우능부분길항TGF-β1유도LX-2세포CTGF mRNA화Col Ⅰ mRNA전록화Col Ⅰ단백분비적증가(t=2.99,3.09,3.02,균P＜0.05).TGF-β1대LX-2세포주기진정무영향.결론:CTGF시TGF-β1작용하인간성상세포합성Col Ⅰ적하유개도자,TGF-β1대HSC주기진정무영향,파향CTGF유가능성위간섬유화기인치료적신파점.