CAJ | 학술논문

牛抗菌肽Bac7-Bac5-βdefense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析
우항균태Bac7-Bac5-βdefense천련기인재곤충간상병독계통중적표체급기산물적활성분석
Expression of the Fusion Gene Encoding Bovine Antimicrobial Peptides Bac7-Bac5-β defense in Insect Rod-shaped Virus System and Analysis of the Fusion Protein Antimicrobial Activity

万方数据

农业生物技术学报農業生物技術學報 농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年 3期 380-384 ,共5页

赵昆%刘思国%王春来%宫强%迟磊%刘建东%王勇%云孟克%刘慧芳%孙延鸣

조곤%류사국%왕춘래%궁강%지뢰%류건동%왕용%운맹극%류혜방%손연명

牛抗菌肽%Bac7、Bac5和β defense融合基因%昆虫杆状病毒表达系统%spodoptera fragiperda 9(Sf9)细胞%重组表达%抑菌活性牛抗菌肽%Bac7、Bac5和β defense融閤基因%昆蟲桿狀病毒錶達繫統%spodoptera fragiperda 9(Sf9)細胞%重組錶達%抑菌活性
우항균태%Bac7、Bac5화β defense융합기인%곤충간상병독표체계통%spodoptera fragiperda 9(Sf9)세포%중조표체%억균활성
牛抗菌肽%Bac7、Bac5和β defense融合基因%昆虫杆状病毒表达系统%spodoptera fragiperda 9(Sf9)细胞%重组表达

根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bat5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-BacS-β defense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾St9单层细胞,收集Si9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20 kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%.体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性.
근거GenBank중공포적우항균태bac7、bat5화βdefense(LAP기인)성숙태기인서렬,인공합성료항균태융합기인Bac7-BacS-β defense,극륭도BAC-TO-BACTM중조간상병독표체계통적pFAST HTb재체중,구건료중조전좌재체pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,전화DH10Bac대장간균(Escherichia coli)감수태세포,PCR방법사선양성균락,추제대분자질립DNA,획득중조간상병독천사재체Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,전염곤충초지야아(Bombyx mandarina)Sf9세포출현병변후,수집함유중조병독과립적배양상청,중신감염초지야아St9단층세포,수집Si9세포초성파쇄,12%SDS-취병희선알응효전영가견표체적융합단백대,분자량대소위20 kD,표체량약점세포총단백적10.6%.체외억균실험표명중조적rBac7-Bac5-βdefense단백대대장간균,구유억균활성.