医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
5期
401-405
,共5页
rno-miR-16%miRNA%慢病毒%载体构建与表达
rno-miR-16%miRNA%慢病毒%載體構建與錶達
rno-miR-16%miRNA%만병독%재체구건여표체
目的 克隆微小RNA rno-miR-16,构建其慢病毒表达载体pLV-miR-16并包装成慢病毒颗粒,为进一步研究miR-16的功能奠定了实验基础.方法 从大鼠细胞基因组中用PCR 的方法扩增miR-16 的前体,构建了miR-16的重组表达载体pLV-miR-16,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物(pPACK-GAG、pPACK-REV和pVSV)共转染包装细胞293TN细胞,包装产生慢病毒,以293TN细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度.结果 经PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,成功构建携带大鼠miR-16基因重组慢病毒载体.倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293TN呈绿色荧光,并测得108＞ifu/ml.结论 成功构建大鼠慢病毒载体pLV-miR-16,为深入研究rno-miR-16的生物学功能奠定了基础.
目的 剋隆微小RNA rno-miR-16,構建其慢病毒錶達載體pLV-miR-16併包裝成慢病毒顆粒,為進一步研究miR-16的功能奠定瞭實驗基礎.方法 從大鼠細胞基因組中用PCR 的方法擴增miR-16 的前體,構建瞭miR-16的重組錶達載體pLV-miR-16,脂質體法將重組慢病毒載體和包裝質粒混閤物(pPACK-GAG、pPACK-REV和pVSV)共轉染包裝細胞293TN細胞,包裝產生慢病毒,以293TN細胞綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的錶達水平測定病毒滴度.結果 經PCR擴增檢測暘性菌落和測序證實,成功構建攜帶大鼠miR-16基因重組慢病毒載體.倒置熒光顯微鏡下觀察可見包裝細胞293TN呈綠色熒光,併測得108＞ifu/ml.結論 成功構建大鼠慢病毒載體pLV-miR-16,為深入研究rno-miR-16的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 극륭미소RNA rno-miR-16,구건기만병독표체재체pLV-miR-16병포장성만병독과립,위진일보연구miR-16적공능전정료실험기출.방법 종대서세포기인조중용PCR 적방법확증miR-16 적전체,구건료miR-16적중조표체재체pLV-miR-16,지질체법장중조만병독재체화포장질립혼합물(pPACK-GAG、pPACK-REV화pVSV)공전염포장세포293TN세포,포장산생만병독,이293TN세포록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)적표체수평측정병독적도.결과 경PCR확증검측양성균락화측서증실,성공구건휴대대서miR-16기인중조만병독재체.도치형광현미경하관찰가견포장세포293TN정록색형광,병측득108＞ifu/ml.결론 성공구건대서만병독재체pLV-miR-16,위심입연구rno-miR-16적생물학공능전정료기출.
