生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
5期
699-704
,共6页
李鸿辉%冯冲%王宁%闫军%哈福%陈红星%樊宝良%潘登科
李鴻輝%馮遲%王寧%閆軍%哈福%陳紅星%樊寶良%潘登科
리홍휘%풍충%왕저%염군%합복%진홍성%번보량%반등과
Myostatin基因%缺口修复%基因打靶%正负筛选%大白猪
Myostatin基因%缺口脩複%基因打靶%正負篩選%大白豬
Myostatin기인%결구수복%기인타파%정부사선%대백저
目的:用缺口修复等技术构建Myostatin(肌肉生长抑制素,MSTN)基因打靶载体,并对大白猪胎儿成纤维体细胞进行转染,获得基因敲除细胞.方法与结果:首先构建用于MSTN基因同源长臂(LA)的抓捕载体,然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复,从含大自猪MSTN基因座的细菌人工染色体上亚克隆9.9 kb的LA到抓捕载体上,经过部分序列测定,同源性为100%;通过PCR获得1.4 kb的同源短臂(SA);将LA和SA连入载体pLOXP,构建含有neo和tk正负筛选标记基因的MSTN基因打靶载体pLOXP-MSTN-KO;将线性化的pLOXP-MSTN-KO通过电转染整合到大白猪胎儿成纤维细胞基因组中,利用G418和丙氧鸟苷进行药物筛选,获得抗性细胞克隆890个,通过PCR和DNA测序鉴定获得基因敲除的细胞克隆4个.结论:构建了有效的MSTN基因打靶载体,通过转染获得基因敲除细胞,为利用体细胞核移植制备MSTN基因敲除猪奠定了基础.
目的:用缺口脩複等技術構建Myostatin(肌肉生長抑製素,MSTN)基因打靶載體,併對大白豬胎兒成纖維體細胞進行轉染,穫得基因敲除細胞.方法與結果:首先構建用于MSTN基因同源長臂(LA)的抓捕載體,然後在大腸桿菌內利用Red同源重組繫統介導的缺口脩複,從含大自豬MSTN基因座的細菌人工染色體上亞剋隆9.9 kb的LA到抓捕載體上,經過部分序列測定,同源性為100%;通過PCR穫得1.4 kb的同源短臂(SA);將LA和SA連入載體pLOXP,構建含有neo和tk正負篩選標記基因的MSTN基因打靶載體pLOXP-MSTN-KO;將線性化的pLOXP-MSTN-KO通過電轉染整閤到大白豬胎兒成纖維細胞基因組中,利用G418和丙氧鳥苷進行藥物篩選,穫得抗性細胞剋隆890箇,通過PCR和DNA測序鑒定穫得基因敲除的細胞剋隆4箇.結論:構建瞭有效的MSTN基因打靶載體,通過轉染穫得基因敲除細胞,為利用體細胞覈移植製備MSTN基因敲除豬奠定瞭基礎.
목적:용결구수복등기술구건Myostatin(기육생장억제소,MSTN)기인타파재체,병대대백저태인성섬유체세포진행전염,획득기인고제세포.방법여결과:수선구건용우MSTN기인동원장비(LA)적조포재체,연후재대장간균내이용Red동원중조계통개도적결구수복,종함대자저MSTN기인좌적세균인공염색체상아극륭9.9 kb적LA도조포재체상,경과부분서렬측정,동원성위100%;통과PCR획득1.4 kb적동원단비(SA);장LA화SA련입재체pLOXP,구건함유neo화tk정부사선표기기인적MSTN기인타파재체pLOXP-MSTN-KO;장선성화적pLOXP-MSTN-KO통과전전염정합도대백저태인성섬유세포기인조중,이용G418화병양조감진행약물사선,획득항성세포극륭890개,통과PCR화DNA측서감정획득기인고제적세포극륭4개.결론:구건료유효적MSTN기인타파재체,통과전염획득기인고제세포,위이용체세포핵이식제비MSTN기인고제저전정료기출.
