大肠杆菌中表达CrylC基因及其重组表达产物的纯化及复性
대장간균중표체CrylC기인급기중조표체산물적순화급복성
Expression in E.coli.Purification and Refolding of Recombinant CrylC Gene from Bacillus thuringiensis
  • 万方数据
    食品科学 식품과학
    FOOD SCIENCE
    2011年 7期 211-215 ,共5页

    曹思硕%许文涛%冉文君%梁立兴%贺晓云%罗云波%元延芳%黄昆仑

    조사석%허문도%염문군%량립흥%하효운%라운파%원연방%황곤륜

    CrylC蛋白%稀有密码子%包涵体%表达%纯化%复性折叠 CrylC蛋白%稀有密碼子%包涵體%錶達%純化%複性摺疊
    CrylC단백%희유밀마자%포함체%표체%순화%복성절첩
    通过PCR方法将苏云金芽孢杆菌CrylC基因从原始质粒中克隆出来.由于CrylC基因携带了大量大肠杆菌稀有密码子,因此用PCR方法对其前86个密码子进行修改,以提高其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量.CrylC蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式大量表达,将包涵体用8mol/L尿素溶解并用His Trap(TM)FF凝胶柱纯化.所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性折叠,最终得到可溶并有生物活性(由三化螟活性实验验证)的蛋白.CrylC蛋白纯度可达99.2%.
    통과PCR방법장소운금아포간균CrylC기인종원시질립중극륭출래.유우CrylC기인휴대료대량대장간균희유밀마자,인차용PCR방법대기전86개밀마자진행수개,이제고기재대장간균BL21(DE3)중적표체량.CrylC단백재대장간균BL21(DE3)중이포함체형식대량표체,장포함체용8mol/L뇨소용해병용His Trap(TM)FF응효주순화.소득순화단백재복성완충액중복성절첩,최종득도가용병유생물활성(유삼화명활성실험험증)적단백.CrylC단백순도가체99.2%.
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