CAJ | 학술논문

目的应用分子生物学技术检测角膜上皮中激活正常T细胞表达和分泌的调节物(RANTES)和酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)基因表达,以期为角膜移植排斥反应的早期诊断提供实验依据.方法随机选择行穿透性角膜移植(PK)手术患者30例(30眼).其中男21例21眼,女9例9眼;年龄6～78岁,平均53.2岁;分3组,并以行准分子激光屈光性角膜手术(PRK)患者的正常角膜上皮作为对照.应用环钻取组Ⅰ和Ⅱ角膜上皮.应用RNA提取、RT-PCR、Northern印迹杂交、组织病理、激光密度扫描半定量等技术,对比观察排斥、非排斥离体角膜片上皮及正常、PK术后在体角膜上皮中RANTES和SPARC基因的表达.与此同时应用裂隙灯、共聚焦显微镜(CMTF)检查患者角膜有无排斥反应的体征.结果正常角膜SPARC呈现低表达,未见RANTES表达.SPARC在3组表达率分别为100%、90%、100%,3组比较无显著性差异(P>0.05).RANTES在组Ⅰ的离体片上皮中呈高表达 80%;在组Ⅱ10例患者中均未见表达;在组Ⅲ角膜上皮样本中,有60%呈现高表达.这说明RANTES 的表达与排斥的发生呈正相关.在对组Ⅲ患者进行裂隙灯、CMTF检查的同时进行RANTES基因检测,阳性率分别为30%、50%、60%,3组比较有一定的差异性(P<0.05),RANTES表达与临床诊断有较高的相关性、一致性和时相性.基因检测的阳性率高于临床检查,二者相互印证.结论对于角膜移植排斥反应,RANTES基因表达敏感性及阳性率高于临床检查方法,提示可以作为监测角膜排斥反应可靠的实验指标,其临床重要意义,有待今后验证.
목적응용분자생물학기술검측각막상피중격활정상T세포표체화분비적조절물(RANTES)화산성부함광안산분비형단백(SPARC)기인표체,이기위각막이식배척반응적조기진단제공실험의거.방법수궤선택행천투성각막이식(PK)수술환자30례(30안).기중남21례21안,녀9례9안;년령6～78세,평균53.2세;분3조,병이행준분자격광굴광성각막수술(PRK)환자적정상각막상피작위대조.응용배찬취조Ⅰ화Ⅱ각막상피.응용RNA제취、RT-PCR、Northern인적잡교、조직병리、격광밀도소묘반정량등기술,대비관찰배척、비배척리체각막편상피급정상、PK술후재체각막상피중RANTES화SPARC기인적표체.여차동시응용렬극등、공취초현미경(CMTF)검사환자각막유무배척반응적체정.결과정상각막SPARC정현저표체,미견RANTES표체.SPARC재3조표체솔분별위100%、90%、100%,3조비교무현저성차이(P>0.05).RANTES재조Ⅰ적리체편상피중정고표체 80%;재조Ⅱ10례환자중균미견표체;재조Ⅲ각막상피양본중,유60%정현고표체.저설명RANTES 적표체여배척적발생정정상관.재대조Ⅲ환자진행렬극등、CMTF검사적동시진행RANTES기인검측,양성솔분별위30%、50%、60%,3조비교유일정적차이성(P<0.05),RANTES표체여림상진단유교고적상관성、일치성화시상성.기인검측적양성솔고우림상검사,이자상호인증.결론대우각막이식배척반응,RANTES기인표체민감성급양성솔고우림상검사방법,제시가이작위감측각막배척반응가고적실험지표,기림상중요의의,유대금후험증.