中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2005年
3期
179-182
,共4页
余冰%倪明%雷萍%李文涵%朱慧芬%张悦%唐珍洁%程欣%沈关心
餘冰%倪明%雷萍%李文涵%硃慧芬%張悅%唐珍潔%程訢%瀋關心
여빙%예명%뢰평%리문함%주혜분%장열%당진길%정흔%침관심
人源噬菌体抗体库%单链抗体%阴性筛选%阳性筛选%生物淘洗
人源噬菌體抗體庫%單鏈抗體%陰性篩選%暘性篩選%生物淘洗
인원서균체항체고%단련항체%음성사선%양성사선%생물도세
目的:从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础.方法:以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1 Library)经三轮筛选后,阳性菌质粒PCR确定其中含有单链抗体基因的克隆,通过细胞ELISA及FCM筛选特异性的单链抗体噬菌体,通过ABI3730全自动荧光测序仪测序,并通过GeneBank比对进行同源性分析,IPTG诱导可溶性单链抗体表达,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性.结果:获得了2个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆.经DNA测序后, 在Genebank中与人的免疫球蛋白库进行比对,并用IMGT/V-Quest软件进行分析,确定为2个插入序列不同的单链抗体片段.经细胞ELISA证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合.获得的序列成功登陆Genebank,序列号为AY686498-AY686499.结论:从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系HepG2特异性结合的具有功能活性的单链抗体,为进一步寻找肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础.
目的:從人源噬菌體抗體庫中篩選與肝癌細胞繫HepG2特異性結閤的單鏈抗體,為尋找肝癌細胞錶麵特異性標誌及靶嚮研究奠定基礎.方法:以正常肝細胞繫L02為陰性篩選細胞,以肝癌細胞繫HepG2為暘性篩選靶細胞,從人源噬菌體抗體庫(Griffin.1 Library)經三輪篩選後,暘性菌質粒PCR確定其中含有單鏈抗體基因的剋隆,通過細胞ELISA及FCM篩選特異性的單鏈抗體噬菌體,通過ABI3730全自動熒光測序儀測序,併通過GeneBank比對進行同源性分析,IPTG誘導可溶性單鏈抗體錶達,併檢測其與肝癌細胞株結閤的特異性.結果:穫得瞭2箇特異性較高的暘性噬菌體單箇剋隆.經DNA測序後, 在Genebank中與人的免疫毬蛋白庫進行比對,併用IMGT/V-Quest軟件進行分析,確定為2箇插入序列不同的單鏈抗體片段.經細胞ELISA證明其暘性剋隆菌培養上清可與肝癌細胞株特異性結閤.穫得的序列成功登陸Genebank,序列號為AY686498-AY686499.結論:從人源噬菌體抗體庫中篩選到與肝癌細胞繫HepG2特異性結閤的具有功能活性的單鏈抗體,為進一步尋找肝癌細胞錶麵特異性抗原及靶嚮研究奠定瞭基礎.
목적:종인원서균체항체고중사선여간암세포계HepG2특이성결합적단련항체,위심조간암세포표면특이성표지급파향연구전정기출.방법:이정상간세포계L02위음성사선세포,이간암세포계HepG2위양성사선파세포,종인원서균체항체고(Griffin.1 Library)경삼륜사선후,양성균질립PCR학정기중함유단련항체기인적극륭,통과세포ELISA급FCM사선특이성적단련항체서균체,통과ABI3730전자동형광측서의측서,병통과GeneBank비대진행동원성분석,IPTG유도가용성단련항체표체,병검측기여간암세포주결합적특이성.결과:획득료2개특이성교고적양성서균체단개극륭.경DNA측서후, 재Genebank중여인적면역구단백고진행비대,병용IMGT/V-Quest연건진행분석,학정위2개삽입서렬불동적단련항체편단.경세포ELISA증명기양성극륭균배양상청가여간암세포주특이성결합.획득적서렬성공등륙Genebank,서렬호위AY686498-AY686499.결론:종인원서균체항체고중사선도여간암세포계HepG2특이성결합적구유공능활성적단련항체,위진일보심조간암세포표면특이성항원급파향연구전정료기출.
