CAJ | 학술논문

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡.通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用.用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、 P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化.结果:ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力,10 ng·ml-1 ZGDHu-1作用HL-60细胞24～72 h 后,MTT法检测细胞增殖抑制率分别为(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%和(21.3±1.2)%,均显著高于对照组(P＜0.01);48 h、72 h 的IC50分别为180、180 ng·ml-1. HL-60细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;出现典型的细胞形态改变,DNA片端化,经50～1 000 ng·ml-1的ZGDHu-1作用后,SubG1由(3.2±1.6)%上升至(67.7±5.9)%,与对照组(0.7±0.5)%比较,具有显著性差异(P＜0.05),Annexin-V/PI标记升高,TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡.HL-60细胞经10～100 ng·ml-1 ZGDHu-1作用 3 d 后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加.ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas表达增强,而P53表达无变化.随ZGDHu-1作用的浓度增加,ΔΨm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高.结论:ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力,低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化,高浓度时促进细胞凋亡,其机制可能与Bax表达上调,线粒体膜电位下降等有关.
목적:관찰사진이갑선알(ZGDHu-1)체외억제백혈병세포주HL-60증식,유도세포분화화조망작용,병대기작용궤제진행초보탐토.방법:장불동농도적ZGDHu-1여HL-60세포재체외배양,태반람염색、MTT비색법관찰대HL-60세포증식적억제작용;용세포형태학、DNA응효전영、DNA함량급세포주기분석、Annexin-V/PI쌍표기화DNA편단원위말단표기법등분석세포조망.통과NBT시험、세포표면항원CD11b、CD13、CD14、CD64화세포형태학검측ZGDHu-1대HL-60세포적분화작용.용Rh123/PI측정선립체과막전위(ΔΨm),용류식세포술검측Bcl-2、Bax、 P53、Fas화선립체막단백적표체변화.결과:ZGDHu-1정현작용시간화제량적량효성억제HL-60세포증식화활력,10 ng·ml-1 ZGDHu-1작용HL-60세포24～72 h 후,MTT법검측세포증식억제솔분별위(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%화(21.3±1.2)%,균현저고우대조조(P＜0.01);48 h、72 h 적IC50분별위180、180 ng·ml-1. HL-60세포경ZGDHu-1작용후,대부분세포조체우G2-M기,G0/1기세포감소;출현전형적세포형태개변,DNA편단화,경50～1 000 ng·ml-1적ZGDHu-1작용후,SubG1유(3.2±1.6)%상승지(67.7±5.9)%,여대조조(0.7±0.5)%비교,구유현저성차이(P＜0.05),Annexin-V/PI표기승고,TUNEL염색후적조망세포적특정성개변등균증실ZGDHu-1능유도HL-60세포조망.HL-60세포경10～100 ng·ml-1 ZGDHu-1작용 3 d 후,세포발생부분분화,NBT양성솔증가,세포표면CD11b、CD13、CD14、CD64표체증가.ZGDHu-1유도HL-60세포조망화분화과정중,Bcl-2표체무변화,단Bax표체현저증가,Bax/Bcl-2적비치승고,Fas표체증강,이P53표체무변화.수ZGDHu-1작용적농도증가,ΔΨm하강、이선립체막단백표체현저승고.결론:ZGDHu-1능억제HL-60세포증식화세포활력,저농도시유도HL-60세포향립단계분화,고농도시촉진세포조망,기궤제가능여Bax표체상조,선립체막전위하강등유관.