中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2007年
1期
28-33
,共6页
吴少平%王玉霞%武军华%贾培媛%王晨宇%李前%孙曼霁
吳少平%王玉霞%武軍華%賈培媛%王晨宇%李前%孫曼霽
오소평%왕옥하%무군화%가배원%왕신우%리전%손만제
蛋白质P53%蛋白转导域%氧依赖性降解域%细胞凋亡
蛋白質P53%蛋白轉導域%氧依賴性降解域%細胞凋亡
단백질P53%단백전도역%양의뢰성강해역%세포조망
目的 研究P53蛋白C端(P53c)对p53基因突变型肿瘤细胞SW480的促凋亡作用.方法 用人类免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白转导域(TAT)将P53c运载进入肿瘤细胞,用氧依赖性降解区域(ODD)控制P53c在组织中的稳定性.通过PCR方法制备TAT-ODD-p53c(TOPc), TAT-p53c(TPc)及p53c基因,与pGEX4T载体连接后在大肠杆菌中表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-TAT-ODD-P53c(GST-TOPc), GST-TAT-P53c(GST-TPc)及GST-P53c等融合蛋白.免疫组化方法检测TAT蛋白运载融合蛋白穿过SW480细胞膜的作用,MTT法检测融合蛋白对SW480细胞活力的影响,流式细胞仪检测致SW480细胞凋亡作用.结果 成功构建pGEX系列表达载体,并在大肠杆菌中可溶性表达.Western 印迹结果表明,重组蛋白可以和GST单克隆抗体特异性结合.免疫组化显示GST-TPc, GST-TOPcm及GST-TOPc均能进入SW480细胞,GST-TPc能明显降低SW480细胞活性,导致SW480细胞凋亡.含ODD的融合蛋白在常氧环境中对肿瘤细胞有轻度促凋亡作用.结论 TAT可以介导其融合蛋白跨越细胞膜.GST-TPc可引起p53突变型肿瘤细胞凋亡.
目的 研究P53蛋白C耑(P53c)對p53基因突變型腫瘤細胞SW480的促凋亡作用.方法 用人類免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白轉導域(TAT)將P53c運載進入腫瘤細胞,用氧依賴性降解區域(ODD)控製P53c在組織中的穩定性.通過PCR方法製備TAT-ODD-p53c(TOPc), TAT-p53c(TPc)及p53c基因,與pGEX4T載體連接後在大腸桿菌中錶達穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)-TAT-ODD-P53c(GST-TOPc), GST-TAT-P53c(GST-TPc)及GST-P53c等融閤蛋白.免疫組化方法檢測TAT蛋白運載融閤蛋白穿過SW480細胞膜的作用,MTT法檢測融閤蛋白對SW480細胞活力的影響,流式細胞儀檢測緻SW480細胞凋亡作用.結果 成功構建pGEX繫列錶達載體,併在大腸桿菌中可溶性錶達.Western 印跡結果錶明,重組蛋白可以和GST單剋隆抗體特異性結閤.免疫組化顯示GST-TPc, GST-TOPcm及GST-TOPc均能進入SW480細胞,GST-TPc能明顯降低SW480細胞活性,導緻SW480細胞凋亡.含ODD的融閤蛋白在常氧環境中對腫瘤細胞有輕度促凋亡作用.結論 TAT可以介導其融閤蛋白跨越細胞膜.GST-TPc可引起p53突變型腫瘤細胞凋亡.
목적 연구P53단백C단(P53c)대p53기인돌변형종류세포SW480적촉조망작용.방법 용인류면역결함병독TAT단백적단백전도역(TAT)장P53c운재진입종류세포,용양의뢰성강해구역(ODD)공제P53c재조직중적은정성.통과PCR방법제비TAT-ODD-p53c(TOPc), TAT-p53c(TPc)급p53c기인,여pGEX4T재체련접후재대장간균중표체곡광감태-S-전이매(GST)-TAT-ODD-P53c(GST-TOPc), GST-TAT-P53c(GST-TPc)급GST-P53c등융합단백.면역조화방법검측TAT단백운재융합단백천과SW480세포막적작용,MTT법검측융합단백대SW480세포활력적영향,류식세포의검측치SW480세포조망작용.결과 성공구건pGEX계렬표체재체,병재대장간균중가용성표체.Western 인적결과표명,중조단백가이화GST단극륭항체특이성결합.면역조화현시GST-TPc, GST-TOPcm급GST-TOPc균능진입SW480세포,GST-TPc능명현강저SW480세포활성,도치SW480세포조망.함ODD적융합단백재상양배경중대종류세포유경도촉조망작용.결론 TAT가이개도기융합단백과월세포막.GST-TPc가인기p53돌변형종류세포조망.
