CAJ | 학술논문

为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增.以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人.采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品.通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3～300 ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30 ng/μL时,变异系数最小(＜10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%.运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90～-1.30,患者的△CT值范围是-2.95～-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P＜0.001).唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的.因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的.
위료건립일충기우다중실시형광상대정량PCR기술병응용지우당씨종합정분자진단,선택21호염색체상당씨종합정특이구역기인편단(DSCR3)위목적기인,이12호염색체상적린산감유철탈경매기인(GAPDH)위삼조기인,설계합성량대인물이급분별이불동형광표기적TaqMan탐침,재동일개반응관중진행확증.이상대정량지표△CT치구분당씨종합정환자여정상인.채용EB병독전화기술,파당씨종합정환자외주혈B림파세포전화성영생림파모세포계작위표준품.통과우화반응조건,사득목적기인화삼조기인적확증효솔기본일치,접근100%,모판농도재3～300 ng/μL범위내,△CT치적변이계수소우15%,농도재30 ng/μL시,변이계수최소(＜10%),이해농도적DNA작위모판진행비내화비간실험적△CT치중복성호,변이계수분별위9.8%화13.3%.운용건립적방법검측20례당씨종합정환자적혈표본화30례정상인적혈표본,정상인△CT치범위시-1.90～-1.30,환자적△CT치범위시-2.95～-2.15,량조지간무교차중첩,유명현차이(P＜0.001).당씨종합정환자영생세포계건계성공,염색체핵형화DNA분석표명건계전후유전시은정적.인차,실시형광정량PCR비교△CT치적상대정량법쾌속진단당씨종합정시가행적.