安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2010年
6期
737-739
,共3页
王兴满%吴琼%汤仁树%甘霖%赵俊%王明丽
王興滿%吳瓊%湯仁樹%甘霖%趙俊%王明麗
왕흥만%오경%탕인수%감림%조준%왕명려
HCMV pp65蛋白%E.coli BL21(DE3)%多克隆抗血清
HCMV pp65蛋白%E.coli BL21(DE3)%多剋隆抗血清
HCMV pp65단백%E.coli BL21(DE3)%다극륭항혈청
目的 采用原核表达系统获得HCMV pp65目的 蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清.方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清.采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性.结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清.结论 在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清.为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础.
目的 採用原覈錶達繫統穫得HCMV pp65目的 蛋白,免疫傢兔製備該蛋白特異性抗血清.方法構建錶達GST-HCMV pp65融閤蛋白的質粒,在大腸桿菌中誘導錶達,經GST親和層析純化後的pp65蛋白免疫傢兔,穫得兔多剋隆抗血清.採用ELISA、SDS-PAGE電泳及Western blot檢測純化後的蛋白,併以間接免疫熒光染色法檢測鑒定該蛋白的抗原性.結果成功構建PGEX-5X-pp65重組質粒,轉化E.coli BL21(DE3)感受態細胞,穫得可溶性的融閤蛋白;GST親和層析純化後的蛋白免疫傢兔穫得特異性抗血清.結論 在原覈細胞中成功穫得瞭融閤蛋白pp65,免疫傢兔後穫得具有高度特異性抗血清.為進一步揭示該蛋白的功能及作用機製奠定瞭重要基礎.
목적 채용원핵표체계통획득HCMV pp65목적 단백,면역가토제비해단백특이성항혈청.방법구건표체GST-HCMV pp65융합단백적질립,재대장간균중유도표체,경GST친화층석순화후적pp65단백면역가토,획득토다극륭항혈청.채용ELISA、SDS-PAGE전영급Western blot검측순화후적단백,병이간접면역형광염색법검측감정해단백적항원성.결과성공구건PGEX-5X-pp65중조질립,전화E.coli BL21(DE3)감수태세포,획득가용성적융합단백;GST친화층석순화후적단백면역가토획득특이성항혈청.결론 재원핵세포중성공획득료융합단백pp65,면역가토후획득구유고도특이성항혈청.위진일보게시해단백적공능급작용궤제전정료중요기출.
