生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
808-811
,共4页
刘大伟%孙忠科%郭燕红%黄留玉%袁静
劉大偉%孫忠科%郭燕紅%黃留玉%袁靜
류대위%손충과%곽연홍%황류옥%원정
长双歧杆菌NCC2705%质粒构建%电转化%绿色荧光蛋白
長雙歧桿菌NCC2705%質粒構建%電轉化%綠色熒光蛋白
장쌍기간균NCC2705%질립구건%전전화%록색형광단백
目的:建立长双歧杆菌NCC2705高效稳定的电转化系统,并以其为宿主表达绿色荧光蛋白(GFP),构建一个稳定的带报告基因的表达载体.方法:从双歧杆菌克隆载体pDG7中切取其在双歧杆菌中复制所必需的pMB1复制子插入质粒pUC19的多克隆位点区,并将gfp基因在双歧杆菌中进行表达;设计双歧杆菌电击转化体系,研究在不同电击电压条件下的电转效率.结果:首先构建了大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭质粒pUB1和带有gfp基因的表达质粒pUB2,用电击法将之转化至双歧杆菌,当细菌生长到D600nm约为0.5时制备感受态细胞,在电容25 μF、电阻200 Ω、电压12.5 kV/cm的电击条件下进行完整质粒转化,可得到较高的转化率.结论:构建了以长双歧杆菌NCC2705为宿主的高效稳定的表达系统,为进一步研究益生菌的分子生物学和功能特性提供了基础.
目的:建立長雙歧桿菌NCC2705高效穩定的電轉化繫統,併以其為宿主錶達綠色熒光蛋白(GFP),構建一箇穩定的帶報告基因的錶達載體.方法:從雙歧桿菌剋隆載體pDG7中切取其在雙歧桿菌中複製所必需的pMB1複製子插入質粒pUC19的多剋隆位點區,併將gfp基因在雙歧桿菌中進行錶達;設計雙歧桿菌電擊轉化體繫,研究在不同電擊電壓條件下的電轉效率.結果:首先構建瞭大腸桿菌-長雙歧桿菌穿梭質粒pUB1和帶有gfp基因的錶達質粒pUB2,用電擊法將之轉化至雙歧桿菌,噹細菌生長到D600nm約為0.5時製備感受態細胞,在電容25 μF、電阻200 Ω、電壓12.5 kV/cm的電擊條件下進行完整質粒轉化,可得到較高的轉化率.結論:構建瞭以長雙歧桿菌NCC2705為宿主的高效穩定的錶達繫統,為進一步研究益生菌的分子生物學和功能特性提供瞭基礎.
목적:건립장쌍기간균NCC2705고효은정적전전화계통,병이기위숙주표체록색형광단백(GFP),구건일개은정적대보고기인적표체재체.방법:종쌍기간균극륭재체pDG7중절취기재쌍기간균중복제소필수적pMB1복제자삽입질립pUC19적다극륭위점구,병장gfp기인재쌍기간균중진행표체;설계쌍기간균전격전화체계,연구재불동전격전압조건하적전전효솔.결과:수선구건료대장간균-장쌍기간균천사질립pUB1화대유gfp기인적표체질립pUB2,용전격법장지전화지쌍기간균,당세균생장도D600nm약위0.5시제비감수태세포,재전용25 μF、전조200 Ω、전압12.5 kV/cm적전격조건하진행완정질립전화,가득도교고적전화솔.결론:구건료이장쌍기간균NCC2705위숙주적고효은정적표체계통,위진일보연구익생균적분자생물학화공능특성제공료기출.
