临床与实验病理学杂志
臨床與實驗病理學雜誌
림상여실험병이학잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL PATHOLOGY
2012年
1期
33-37
,共5页
周建民%王勤章%丁国富%屠松%牛世杰%杨发英
週建民%王勤章%丁國富%屠鬆%牛世傑%楊髮英
주건민%왕근장%정국부%도송%우세걸%양발영
干细胞白血病基因%腺病毒载体%转染%Cajal样间质细胞
榦細胞白血病基因%腺病毒載體%轉染%Cajal樣間質細胞
간세포백혈병기인%선병독재체%전염%Cajal양간질세포
目的 构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达.方法 采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达.结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达.结论 成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达.
目的 構建含有人榦細胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重組腺病毒載體,併觀察其對豚鼠膀胱Cajal樣間質細胞的轉染及其介導SCL基因的錶達.方法 採用PCR方法從含人SCL基因質粒中擴增SCL基因,連接到腺病毒穿梭質粒的多剋隆位點上,構建重組穿梭質粒pDC315-EGFP/SCL,在脂質體介導下與腺病毒輔助大質粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共轉染293細胞,包裝產生複製缺陷型重組腺病毒pDC315-SCL經HEK293細胞擴增,純化後測定病毒滴度.通過觀察綠色熒光蛋白的錶達評估重組腺病毒對Cajal樣間質細胞的轉染率,RT-PCR法分析轉染Cajal樣間質細胞後SCL mRNA的錶達.結果 PCR結果和Western blot法檢測證實pDC315-SCL重組腺病毒載體構建成功,滴度達到1×1010 PFU/ml,對膀胱Cajal樣間質細胞的轉染率高達98%,RT-PCR法檢測轉染Cajal樣間質細胞後SCL mRNA有錶達.結論 成功構建pDC315-SCL重組腺病毒載體對Cajal樣間質細胞有很彊的轉染能力,可介導SCL基因在Cajal樣間質細胞的錶達.
목적 구건함유인간세포백혈병(stem cell leukemia,SCL)기인적중조선병독재체,병관찰기대돈서방광Cajal양간질세포적전염급기개도SCL기인적표체.방법 채용PCR방법종함인SCL기인질립중확증SCL기인,련접도선병독천사질립적다극륭위점상,구건중조천사질립pDC315-EGFP/SCL,재지질체개도하여선병독보조대질립pBHGlox(delta)E1,3Cre공전염293세포,포장산생복제결함형중조선병독pDC315-SCL경HEK293세포확증,순화후측정병독적도.통과관찰록색형광단백적표체평고중조선병독대Cajal양간질세포적전염솔,RT-PCR법분석전염Cajal양간질세포후SCL mRNA적표체.결과 PCR결과화Western blot법검측증실pDC315-SCL중조선병독재체구건성공,적도체도1×1010 PFU/ml,대방광Cajal양간질세포적전염솔고체98%,RT-PCR법검측전염Cajal양간질세포후SCL mRNA유표체.결론 성공구건pDC315-SCL중조선병독재체대Cajal양간질세포유흔강적전염능력,가개도SCL기인재Cajal양간질세포적표체.
