畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
4期
488-493
,共6页
邬向东%曲悦%谌南辉%王萍%何后军
鄔嚮東%麯悅%諶南輝%王萍%何後軍
오향동%곡열%심남휘%왕평%하후군
三肽囊素%抗独特型抗体%可变区%重链%轻链%单链抗体%单克隆抗体%噬菌体抗体库
三肽囊素%抗獨特型抗體%可變區%重鏈%輕鏈%單鏈抗體%單剋隆抗體%噬菌體抗體庫
삼태낭소%항독특형항체%가변구%중련%경련%단련항체%단극륭항체%서균체항체고
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链.以cDNA第一链为模板,根据来航鸡 IgG 抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增.在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp).通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库.并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库.用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集.经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产.
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)單剋隆抗體免疫SPF來航鷄,穫得產生抗獨特型抗體的脾細胞,從中提取總RNA,經反轉錄閤成cDNA第一鏈.以cDNA第一鏈為模闆,根據來航鷄 IgG 抗體重鏈(VH)、輕鏈(VL)可變區基因FR設計引物,進行PCR擴增.在體外擴增齣該抗體的可變區VH和VL基因(大小分彆約為370和320 bp).通過重疊延伸反應(SOE),以(Gly4Ser)3為連接肽,將VH和VL基因連接成為VH-Linker-VL ScFv,將ScFv DNA與噬菌粒載體pHEN1的連接產物轉化于大腸桿菌TG1,經輔助噬菌體M13K07感染後,穫得重組的鷄源抗三肽囊素獨特型抗體全套單鏈噬菌體抗體庫.併測得該庫容量約為5×105,噬菌體中ScFv基因的插入率為80%,用輔助噬菌體援救後,得到滴度為1011PFU/mL的初級噬菌體抗體庫.用抗Bursin單剋隆抗體(2F9-4/HU2)進行4輪"吸附-洗脫-擴增"的淘篩,齣現特異性富集.經ELISA、動物試驗錶明所篩選的5箇暘性剋隆可與抗Bursin單剋隆抗體(2F9-4/HU2)特異性結閤,併能促進抗體的生產.
본연구이용항삼태낭소(Bursin)단극륭항체면역SPF래항계,획득산생항독특형항체적비세포,종중제취총RNA,경반전록합성cDNA제일련.이cDNA제일련위모판,근거래항계 IgG 항체중련(VH)、경련(VL)가변구기인FR설계인물,진행PCR확증.재체외확증출해항체적가변구VH화VL기인(대소분별약위370화320 bp).통과중첩연신반응(SOE),이(Gly4Ser)3위련접태,장VH화VL기인련접성위VH-Linker-VL ScFv,장ScFv DNA여서균립재체pHEN1적련접산물전화우대장간균TG1,경보조서균체M13K07감염후,획득중조적계원항삼태낭소독특형항체전투단련서균체항체고.병측득해고용량약위5×105,서균체중ScFv기인적삽입솔위80%,용보조서균체원구후,득도적도위1011PFU/mL적초급서균체항체고.용항Bursin단극륭항체(2F9-4/HU2)진행4륜"흡부-세탈-확증"적도사,출현특이성부집.경ELISA、동물시험표명소사선적5개양성극륭가여항Bursin단극륭항체(2F9-4/HU2)특이성결합,병능촉진항체적생산.
