广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2010年
4期
412-415
,共4页
李黄金%陈伟%赵林%黄志健
李黃金%陳偉%趙林%黃誌健
리황금%진위%조림%황지건
β-半乳糖苷酶%供体%标记位点%互补
β-半乳糖苷酶%供體%標記位點%互補
β-반유당감매%공체%표기위점%호보
目的 构建含ε-NH2标记位点的克隆酶供体免疫分析(CEDIA)系统供体片段.方法 从大肠杆菌基因组克隆β-半乳糖苷酶(β-gal)的α片段基因,通过定点突变在原精氨酸位点处引入赖氨酸突变,与硫氧环蛋白(Trx)融合表达后与Δα片段进行酶学互补活性分析.结果 克隆的α片段为β-gal N端1-56多肽片段,定点突变得R14K、R53K和R14K/R53K等3种突变体.融合表达产物经亲和层析后纯度达到90%以上,且4种α片段的纯度基本一致.各纯化产物显示了不同的酶学互补活性,其中R53K突变体的活性远高于R14K和R14K/R53K的,且与野生型α片段的基本一致.结论 α片段R53K突变体具有作为CEDIA系统含内部标记位点供体的潜力.
目的 構建含ε-NH2標記位點的剋隆酶供體免疫分析(CEDIA)繫統供體片段.方法 從大腸桿菌基因組剋隆β-半乳糖苷酶(β-gal)的α片段基因,通過定點突變在原精氨痠位點處引入賴氨痠突變,與硫氧環蛋白(Trx)融閤錶達後與Δα片段進行酶學互補活性分析.結果 剋隆的α片段為β-gal N耑1-56多肽片段,定點突變得R14K、R53K和R14K/R53K等3種突變體.融閤錶達產物經親和層析後純度達到90%以上,且4種α片段的純度基本一緻.各純化產物顯示瞭不同的酶學互補活性,其中R53K突變體的活性遠高于R14K和R14K/R53K的,且與野生型α片段的基本一緻.結論 α片段R53K突變體具有作為CEDIA繫統含內部標記位點供體的潛力.
목적 구건함ε-NH2표기위점적극륭매공체면역분석(CEDIA)계통공체편단.방법 종대장간균기인조극륭β-반유당감매(β-gal)적α편단기인,통과정점돌변재원정안산위점처인입뢰안산돌변,여류양배단백(Trx)융합표체후여Δα편단진행매학호보활성분석.결과 극륭적α편단위β-gal N단1-56다태편단,정점돌변득R14K、R53K화R14K/R53K등3충돌변체.융합표체산물경친화층석후순도체도90%이상,차4충α편단적순도기본일치.각순화산물현시료불동적매학호보활성,기중R53K돌변체적활성원고우R14K화R14K/R53K적,차여야생형α편단적기본일치.결론 α편단R53K돌변체구유작위CEDIA계통함내부표기위점공체적잠력.
