动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
5-8
,共4页
韩秀杰%张保新%赵凡凡%余风艳%沈红霞%王晓杜
韓秀傑%張保新%趙凡凡%餘風豔%瀋紅霞%王曉杜
한수걸%장보신%조범범%여풍염%침홍하%왕효두
日本脑炎病毒%NS3%原核表达%纯化
日本腦炎病毒%NS3%原覈錶達%純化
일본뇌염병독%NS3%원핵표체%순화
提取猪日本脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增JEV的NS3基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,酶切鉴定和PCR鉴定重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3,转化大肠埃希菌BL21( DE3)菌株,IPTG诱导表达重组His-JEV-NS3蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,his-band试剂盒纯化重组蛋白.获得了1.8 kb NS3基因片段,成功构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3.IPTG诱导获得分子质量为64 ku的His-JEV-NS3蛋白,该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的30％以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,其占总蛋白比例达70％以上.
提取豬日本腦炎病毒(JEV)上海分離株的基因組RNA,反轉錄閤成cDNA,RT-PCR擴增JEV的NS3基因片段,亞剋隆到原覈錶達載體pET-28(a)上,酶切鑒定和PCR鑒定重組原覈錶達質粒pET-28(a)-JEV-NS3,轉化大腸埃希菌BL21( DE3)菌株,IPTG誘導錶達重組His-JEV-NS3蛋白,SDS-PAGE分析重組蛋白的錶達,his-band試劑盒純化重組蛋白.穫得瞭1.8 kb NS3基因片段,成功構建重組原覈錶達質粒pET-28(a)-JEV-NS3.IPTG誘導穫得分子質量為64 ku的His-JEV-NS3蛋白,該蛋白主要以包涵體形式錶達,錶達量佔總菌體蛋白的30％以上,純化後穫得高純度重組蛋白,其佔總蛋白比例達70％以上.
제취저일본뇌염병독(JEV)상해분리주적기인조RNA,반전록합성cDNA,RT-PCR확증JEV적NS3기인편단,아극륭도원핵표체재체pET-28(a)상,매절감정화PCR감정중조원핵표체질립pET-28(a)-JEV-NS3,전화대장애희균BL21( DE3)균주,IPTG유도표체중조His-JEV-NS3단백,SDS-PAGE분석중조단백적표체,his-band시제합순화중조단백.획득료1.8 kb NS3기인편단,성공구건중조원핵표체질립pET-28(a)-JEV-NS3.IPTG유도획득분자질량위64 ku적His-JEV-NS3단백,해단백주요이포함체형식표체,표체량점총균체단백적30％이상,순화후획득고순도중조단백,기점총단백비례체70％이상.
