无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定
무병독가회복성간세포영생화재체적구건화결구감정
Construction and characterization of a vector for virus-free hepatocyte reversible immortalization
  • 万方数据
    现代消化及介入诊疗 현대소화급개입진료
    MODERN DIGESTION & INTERVENTION
    2012年 2期 61-65 ,共5页

    李爱民%王亚东%王泽楠%张洁%罗晓蓓%燕群%白杨%林建华%刘思德

    리애민%왕아동%왕택남%장길%라효배%연군%백양%림건화%류사덕

    生物人工肝%肝细胞永生化%人端粒酶逆转录酶%piggyBac转座子 生物人工肝%肝細胞永生化%人耑粒酶逆轉錄酶%piggyBac轉座子
    생물인공간%간세포영생화%인단립매역전록매%piggyBac전좌자
    目的 构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法.方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak -hTERT(前端)-attB2和attB1 -hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致.结论 成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性.
    목적 구건불휴대병독기인차가회복적간세포영생화재체,우화목전적간세포영생화방법.방법 구건함인단립매역전록매(hTERT)기인적무병독가회복성간세포영생화재체,PCR확증attB1-Kozak -hTERT(전단)-attB2화attB1 -hTERT(후단)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,대상응대소조대절효회수후,통과Gateway중조극륭기술BR반응화LR반응,이급매절련접,구건최종목적재체PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.결과 PCR급매절화측서감정균증실성공구건료간세포영생화재체PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,목적기인서렬여GenBank보도일치.결론 성공구건불휴대병독기인차가실현회복적간세포영생화재체,유망제고영생화간세포림상응용적안전성.
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