中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2002年
9期
596-599
,共4页
郑梦杰%熊冬生%彭晖%范冬梅%朱祯平%杨纯正
鄭夢傑%熊鼕生%彭暉%範鼕梅%硃禎平%楊純正
정몽걸%웅동생%팽휘%범동매%주정평%양순정
基因工程抗体 抗CD20F(ab')2 B-淋巴细胞
基因工程抗體 抗CD20F(ab')2 B-淋巴細胞
기인공정항체 항CD20F(ab')2 B-림파세포
目的:为了简化生产步骤,提高抗体蛋白的生物活性,探索在工程菌体内直接进行抗CD20F(ab')2的高效率分泌性表达.方法:采用单因素考察法优化培养条件,使蛋白G柱和S200-HR分子筛柱分离纯化目的蛋白,用MTT法检测抗CD20F(ab')2抑制Daudi细胞体外生长的活性.结果:发现用论文所选定的最适培养条件,抗CD20F(ab')2的产量有了明显提高,从1.9～2.2 mg/L达到了3.7～4.3 mg/L,F(ab')2在表达产物中所占的比例也从9.7%～13.2%提高到了38.1%～46.8%;使用S200-HR分子筛柱对蛋白G柱亲和纯化后的产物进一步分离纯化,可以使F(ab')2的纯度达到85%以上;MTT法检测结果证明F(ab')2抑制Daudi细胞生长的IC50值为14.6 μg/ml,而Fab'为39.5 μg/ml.结论:实现了抗CD20F(ab')2在工程菌体内的高效率分泌性表达,而且所表达的抗CD20F(ab')2比抗CD20Fab'具有更强的抑制Daudi细胞体外生长的能力.
目的:為瞭簡化生產步驟,提高抗體蛋白的生物活性,探索在工程菌體內直接進行抗CD20F(ab')2的高效率分泌性錶達.方法:採用單因素攷察法優化培養條件,使蛋白G柱和S200-HR分子篩柱分離純化目的蛋白,用MTT法檢測抗CD20F(ab')2抑製Daudi細胞體外生長的活性.結果:髮現用論文所選定的最適培養條件,抗CD20F(ab')2的產量有瞭明顯提高,從1.9～2.2 mg/L達到瞭3.7～4.3 mg/L,F(ab')2在錶達產物中所佔的比例也從9.7%～13.2%提高到瞭38.1%～46.8%;使用S200-HR分子篩柱對蛋白G柱親和純化後的產物進一步分離純化,可以使F(ab')2的純度達到85%以上;MTT法檢測結果證明F(ab')2抑製Daudi細胞生長的IC50值為14.6 μg/ml,而Fab'為39.5 μg/ml.結論:實現瞭抗CD20F(ab')2在工程菌體內的高效率分泌性錶達,而且所錶達的抗CD20F(ab')2比抗CD20Fab'具有更彊的抑製Daudi細胞體外生長的能力.
목적:위료간화생산보취,제고항체단백적생물활성,탐색재공정균체내직접진행항CD20F(ab')2적고효솔분비성표체.방법:채용단인소고찰법우화배양조건,사단백G주화S200-HR분자사주분리순화목적단백,용MTT법검측항CD20F(ab')2억제Daudi세포체외생장적활성.결과:발현용논문소선정적최괄배양조건,항CD20F(ab')2적산량유료명현제고,종1.9～2.2 mg/L체도료3.7～4.3 mg/L,F(ab')2재표체산물중소점적비례야종9.7%～13.2%제고도료38.1%～46.8%;사용S200-HR분자사주대단백G주친화순화후적산물진일보분리순화,가이사F(ab')2적순도체도85%이상;MTT법검측결과증명F(ab')2억제Daudi세포생장적IC50치위14.6 μg/ml,이Fab'위39.5 μg/ml.결론:실현료항CD20F(ab')2재공정균체내적고효솔분비성표체,이차소표체적항CD20F(ab')2비항CD20Fab'구유경강적억제Daudi세포체외생장적능력.
