中华男科学杂志
中華男科學雜誌
중화남과학잡지
NATIONAL JOURNAL OF ANDROLOGY
2004年
12期
925-927
,共3页
夏欣一%黄宇烽%高云%朱照平
夏訢一%黃宇烽%高雲%硃照平
하흔일%황우봉%고운%주조평
精子蛋白%P34H%pQE-30%原核表达%人类
精子蛋白%P34H%pQE-30%原覈錶達%人類
정자단백%P34H%pQE-30%원핵표체%인류
目的:获得纯化的人精子表面蛋白P34H用于基础和临床研究.方法:在克隆到P34H基因编码区全长的基础上,将P34H基因亚克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达载体pQE-30/P34H.将pQE-30/P34H转化至大肠埃希菌后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Ni-NTA树脂进行亲和层析纯化上清中可溶性形式的重组蛋白P34H.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白P34H行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白.结果:经PCR和双酶切鉴定,重组表达载体pQE-30/P34H为正确克隆.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白.结论:用上述原核表达的方法可获得纯化的人精子表面蛋白P34H.
目的:穫得純化的人精子錶麵蛋白P34H用于基礎和臨床研究.方法:在剋隆到P34H基因編碼區全長的基礎上,將P34H基因亞剋隆至原覈錶達載體pQE-30中,構建重組錶達載體pQE-30/P34H.將pQE-30/P34H轉化至大腸埃希菌後,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,通過Ni-NTA樹脂進行親和層析純化上清中可溶性形式的重組蛋白P34H.對錶達純化重組蛋白的質粒進行DNA測序,併對重組蛋白P34H行十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析,鑒定其是否為所需目的蛋白.結果:經PCR和雙酶切鑒定,重組錶達載體pQE-30/P34H為正確剋隆.SDS-PAGE和DNA測序證實,所穫的重組蛋白確繫所需目的蛋白.結論:用上述原覈錶達的方法可穫得純化的人精子錶麵蛋白P34H.
목적:획득순화적인정자표면단백P34H용우기출화림상연구.방법:재극륭도P34H기인편마구전장적기출상,장P34H기인아극륭지원핵표체재체pQE-30중,구건중조표체재체pQE-30/P34H.장pQE-30/P34H전화지대장애희균후,용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,통과Ni-NTA수지진행친화층석순화상청중가용성형식적중조단백P34H.대표체순화중조단백적질립진행DNA측서,병대중조단백P34H행십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석,감정기시부위소수목적단백.결과:경PCR화쌍매절감정,중조표체재체pQE-30/P34H위정학극륭.SDS-PAGE화DNA측서증실,소획적중조단백학계소수목적단백.결론:용상술원핵표체적방법가획득순화적인정자표면단백P34H.
